[發(fā)明專利]交聯(lián)的聚?E?賴氨酸非顆粒狀支持物

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201280028657.8
• 申請日: 2012-04-20
• 公開（公告）號: CN103619911B
• 公開（公告）日: 2017-01-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: D·威靈斯
• 申請（專利權(quán)）人: 斯菲瑞技術(shù)有限公司
• 主分類號: C08G69/48
• 分類號: C08G69/48;C08J3/24;C12N11/02;A61K49/18;A61L15/32
• 代理公司: 中國國際貿(mào)易促進(jìn)委員會專利商標(biāo)事務(wù)所11038
• 代理人: 袁泉

本發(fā)明涉及一種非顆粒狀聚合物支持物（polymeric?support），制備所述支持物的方法和所述支持物在固相過程中的用途。尤其是，本發(fā)明涉及一種含有交聯(lián)的聚-ε-賴氨酸的非顆粒狀聚合物支持物。所述支持物在廣泛的物理和化學(xué)過程中有用，特別是當(dāng)與底物的相互作用是例如固相合成、固相萃取、固相試劑、物質(zhì)的固定化、細(xì)胞培養(yǎng)、催化、色譜分析以及醫(yī)學(xué)診斷所需要的。

對于本發(fā)明，術(shù)語聚合物支持物用于描述以任何形式的聚合物，例如整塊料材、膜、纖維，除了特定的形式。

聚-ε-賴氨酸是一種由通過羧基和第五位（ε）氨基之間的酰胺鍵連接的氨基酸賴氨酸組成的自然發(fā)生的短鏈多分散的聚酰胺。這種結(jié)構(gòu)其不尋常在于所述酰胺鍵由羧基和賴氨酸的第五位（ε）氨基之間形成，而在肽的氨基酸之間并且傳統(tǒng)采用聚賴氨酸的正常肽鍵是在羧基和α氨基之間形成。在自然發(fā)生的聚-ε-賴氨酸的多分散性通常是在25-35個氨基酸之間。在傳統(tǒng)的市售聚賴氨酸中，肽具有更寬的可控性不佳的多分散性，其通常含有5-500個氨基酸的任意。

交聯(lián)的聚-ε-賴氨酸在結(jié)構(gòu)上具有比傳統(tǒng)的聚賴氨酸更有彈性的性質(zhì)，是由于酰胺鍵之間更大的鏈長。結(jié)構(gòu)上聚-ε-賴氨酸實際上是一種α-氨基的尼龍5。

目前，聚-ε-賴氨酸是通過大規(guī)模的細(xì)菌發(fā)酵來制備用作食品防腐劑。其價格低廉并以商業(yè)數(shù)量隨時可得。在本發(fā)明中，我們描述了聚-ε-賴氨酸的交聯(lián)以形成不溶性聚合物支持物，其可應(yīng)用于廣泛的技術(shù)中。這些包括但不限于固相肽合成、固相寡核苷酸合成、固相萃取、固相試劑、物質(zhì)的固定化、細(xì)胞培養(yǎng)、催化、色譜分析、農(nóng)藥的緩釋、和藥品的緩釋、再生醫(yī)學(xué)和醫(yī)學(xué)診斷。

在固相合成過程中有用的固體支持材料是已知的。廣泛的物理和化學(xué)過程采用固體支持材料，包括例如有機分子尤其是肽和寡核苷酸的合成、物質(zhì)的固定化、催化劑的支持物、離子交換、從材料中提取物質(zhì)、診斷和色譜分析。

通常情況下，有機分子的多級合成涉及眾多的分離步驟以在進(jìn)展到隨后階段之前分離在每個階段產(chǎn)生的中間體。這些進(jìn)程往往費時、昂貴并可能對于產(chǎn)率來說是低效的。中間體通常需要純化以除去過量的試劑和反應(yīng)副產(chǎn)物，并且可采用例如沉淀、過濾、雙相溶劑萃取、固相萃取、結(jié)晶和色譜分析的步驟。

固相合成提供了超越液相合成的一些優(yōu)勢。例如，通過可逆地將目標(biāo)分子附著于固體支持物可以在一定程度上避免液相合成中使用的分離步驟。通過過濾和洗滌固體支持物去除過量的試劑和一些副產(chǎn)物。目標(biāo)分子可以在一些過程中以基本上定量的產(chǎn)率回收，這在液相合成中通常是特別困難的。此外，固體支持物上進(jìn)行操作所需的時間通常遠(yuǎn)小于在液相合成中進(jìn)行相應(yīng)階段所需的時間。

在一系列過程中的物質(zhì)固定化也是已知的。例如，在傳統(tǒng)的有機化學(xué)包括化學(xué)催化和生物催化中使用的催化劑的固定化通常使用聚合物支持物。也可以采用固定化的酶進(jìn)行有機化學(xué)反應(yīng)或手性拆分，例如固定化的青霉素酰胺酶用于仲醇的拆分（E.Baldaro等人Tet.Asym.4，1031，(1993）），以及固定化的青霉素G酰胺酶也可用于在制備阿莫西林中芐青霉素的水解（Carleysmith，S.W.和Lilly，M.D.Biotechnol.Bioeng.，21，1057-73，1979）。

固體支持物也可用于在醫(yī)療和診斷應(yīng)用中固定化生物大分子。這包括蛋白質(zhì)、單克隆和多克隆抗體的固定化。細(xì)胞培養(yǎng)通常在固體支持物上進(jìn)行，具有特定的表面特性和形態(tài)。在支持物上的固定化的酶也可用作傳感器來產(chǎn)生信號。一個實例是通過葡萄糖氧化酶/過氧化物酶偶聯(lián)酶系統(tǒng)檢測葡萄糖，其中葡萄糖的存在產(chǎn)生過氧化氫，而這又是過氧化物酶的底物，所述過氧化物酶用于氧化廣泛多樣的底物來提供的顏色、熒光或冷光信號。

其熒光對特定的陽離子或陰離子敏感的各種熒光劑可用于指示特定離子的濃度，包括用于pH測量的氫離子。

聚合顆粒通常用于色譜分析，其中固體支持物被稱為穩(wěn)定相。在特定模式的色譜分析中，穩(wěn)定相的成本可能是限制性的。在其他模式中，穩(wěn)定相的物理性質(zhì)可能降低技術(shù)的效率。例如，親和、離子交換和凝膠滲透色譜分析中常用的軟聚合物因為顆粒的可變形性質(zhì)不能在高流速下使用。用于許多其他模式的色譜分析的剛性大孔聚合物往往是機械易碎的并由此遭受短的使用期的困擾。