[發明專利]用于抑制炎性皮膚老化的物質的篩選方法

有效

• 申請號: 201280028652.5
• 申請日: 2012-04-13
• 公開（公告）號: CN103797127A
• 公開（公告）日: 2014-05-14
• 發明（設計）人: 金智成;李真锳;樸俊星;崔向兌;金寒星;裵芝賢
• 申請（專利權）人: 株式會社愛茉莉太平洋
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02;G01N33/15
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 黎艷;胡杰

技術領域

本發明涉及用于抑制炎性皮膚老化的物質的篩選方法。

背景技術

通常，慢性皮膚炎癥是皺紋產生的主要原因，因為它會降低皮膚的彈性。皮膚一旦出現炎癥，炎癥部位一般會因黑色素的色素沉淀的積累而呈現暗褐色。這種炎癥反應會促進皮膚老化。老化的皮膚會因免疫的下降，尤其因皮膚細胞免疫的降低，而對各種皮膚感染較為脆弱，而且由于血清中自身抗體的不斷增加，還會提高自身免疫性皮膚疾病的患病率。此外，內在性老化的皮膚中的郎格罕細胞（Langerhans?cells）數量少于年輕人皮膚中的郎格罕細胞數量，而在光老化的皮膚中其數量會更少。因此，老化的皮膚甚至在微弱的刺激下也很容易發生炎癥，而此炎癥又會觸發皮膚老化。由此，這種惡性循環將會延續下去。

發明內容

技術問題

本發明涉及提供一種有效的用于抑制炎性皮膚老化的物質的篩選方法。

技術方案

在總方面，本發明提供一種用于抑制炎性皮膚老化的物質的篩選方法，該篩選方法包括：用炎性刺激物處理免疫細胞；用候選物質處理皮膚細胞；用經炎性刺激物處理的免疫細胞處理以候選物質處理的皮膚細胞；以及，測定經免疫細胞處理的皮膚細胞中的基質金屬蛋白酶-1（MMP-1）的濃度。

有益效果

在本發明的一方面，用于抑制炎性皮膚老化的物質的篩選方法能夠有效地篩選出用于抑制炎性皮膚老化的物質。由于本發明的方法可確定能否抑制基質金屬蛋白酶-1（MMP-1），其中基質金屬蛋白酶-1不是一般的MMP-1，而是由炎性細胞因子所引發的MMP-1，因此能夠更精確地篩選出用于抑制炎性皮膚老化的物質。此外，會使用通過實際刺激免疫細胞而生成的細胞因子，而不會使用特定的細胞因子，從而可篩選出具有更高生物相關性的、用于抑制炎性皮膚老化的物質。進一步，由于一次就能確定能否抑制由多種炎性細胞因子所復合誘導的MMP-1生成，因此可更加簡便且有效地篩選出用于抑制炎性皮膚老化的物質。

附圖說明

圖1展示了根據脂多糖（LPS）濃度和種類、以及干擾素-γ（INF-γ）濃度的THP-1細胞中TNF-α的產量。

圖2展示了根據LPS濃度的THP-1細胞存活率。

圖3展示了根據INF-γ濃度的THP-1細胞存活率。

圖4展示了經LPS和INF-γ處理的THP-1細胞的存活率。

圖5展示了經LPS和INF-γ處理的炎性細胞因子的生產水平。

圖6展示了根據以LPS和INF-γ處理的THP-1細胞的NHF細胞中MMP-1的產率。

圖7展示了經黃豆黃素處理的THP-1細胞的存活率。

圖8展示了經黃豆黃素、LPS和INF-γ處理的THP-1細胞的存活率。

圖9展示了經黃豆黃素處理的THP-1細胞中TNF-α的產量。

圖10展示了用黃豆黃素以及有選擇地用LPS和INF-γ處理的炎性細胞因子的產量。

圖11展示了經黃豆黃素處理的NHF細胞的存活率。

圖12展示了經LPS和INF-γ處理的THP-1細胞中MMP-1的產量、以及經黃豆黃素處理的NHF細胞中MMP-1的產量。

具體實施方式

在本發明中，所述術語“皮膚”使用了廣義上的概念，是指覆蓋動物體表的組織，其不僅包括臉、身體等的覆蓋面，還包括頭皮和頭發。

在本發明中，所述術語“炎性皮膚老化”包括由炎癥引發或伴隨的皮膚老化。

下面，具體地描述本發明。

由炎癥反應產生的細胞因子，如TNF-α、IL-1β等，能夠通過與血管內皮上的受體結合而激活幾種與炎癥相關的信號轉導途徑。期間，細胞粘附因子的表達在增加，從而引起炎性細胞的外滲。經過所述炎性細胞的滲透，會生成例如若干種細胞因子或趨化因子等化學趨化活性，然后它們朝著炎癥區域移動，從而誘導免疫反應。

由于這些炎性細胞因子會通過促進基質金屬蛋白酶的表達來誘導膠原蛋白的降解，它們對皮膚老化起著關鍵作用，并且通過與受體的結合來引發連鎖反應。因此，如有任一物質能夠抑制炎性細胞因子的生成，進而能夠抑制由炎性細胞因子誘導的基質金屬蛋白酶-1（MMP-1）的生成時，該物質就能當作用于抑制炎性皮膚老化的物質。