[發(fā)明專利]低過敏原

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201280023847.0
• 申請日: 2012-04-18
• 公開（公告）號: CN103562388A
• 公開（公告）日: 2014-02-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: K·塔基寧;M·L·勞卡寧;H·瑟德隆德;S·于爾海;H·霍爾克里;M·尼米;J·羅威寧
• 申請（專利權(quán)）人: 國家技術(shù)研究中心VTT
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C07K14/415;A61K39/36
• 代理公司: 中國國際貿(mào)易促進委員會專利商標事務(wù)所 11038
• 代理人: 張琤

發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明涉及用作低過敏原的突變體多肽。更具體地，本發(fā)明涉及突變體Bet?v1蛋白以及此類多肽作為用于使樺樹花粉過敏脫敏的低過敏原的用途。此外，本發(fā)明還涉及包含此類多肽的疫苗制劑；此類制劑在免疫接種中的用途；以及抵抗樺樹花粉過敏而進行免疫接種的方法。

發(fā)明背景

過敏由對通常無害的蛋白質(zhì)、過敏原的免疫反應(yīng)引起。過敏性病在世界范圍內(nèi)正在達到流行病的比例。工業(yè)化國家超過25%的人口患有I型過敏并且數(shù)量正在穩(wěn)定增加。樺樹花粉過敏是I型過敏的非常常見的形式。Bet?v1是樺樹花粉的主要過敏原。更多關(guān)于Bet?v1過敏原、其異構(gòu)過敏原和變體的信息，見于WHO網(wǎng)站www.allergen.org。

I型過敏基于免疫球蛋白E(IgE)抗體的形成，當過敏原分子結(jié)合兩個結(jié)合至肥大細胞或嗜堿細胞表面上的受體的IgE抗體并且誘導(dǎo)IgE-FcεRI復(fù)合物的交聯(lián)時，癥狀發(fā)生。這觸發(fā)了生物介質(zhì)（例如組胺和引起炎癥反應(yīng)和癥狀（例如過敏性哮喘、鼻炎、食物和皮膚過敏以及甚至過敏性反應(yīng)）的脂質(zhì)介質(zhì)）的脫粒。

IgE是由兩個相同輕鏈和重鏈組成的大分子。在IgE的重鏈中存在5個結(jié)構(gòu)域：VH、Cε1、Cε2、Cε3和Cε4。完整IgE分子的大小為約200kDa。結(jié)合至其FcεRI受體的Cε2-Cε4片段以及Cε2-Cε4片段的晶體結(jié)構(gòu)已被測定(Garman等人,Nature2000(406):259-266,和Wan等人,Nature?Immunology,2002(3):681-686)。

最近幾年，已測定了大量不同過敏原的三維結(jié)構(gòu)。在結(jié)構(gòu)上，這些過敏原變化相當大，并且還未鑒定出可解釋過敏原引起IgE抗體產(chǎn)生的共同結(jié)構(gòu)基序。然而，有研究表明過敏原性僅限于少數(shù)蛋白質(zhì)家族，從而提出蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)特征也可在過敏原性方面起作用的證據(jù)(Rouvinen等人,PloS?ONE2010(5):e9037；Raudauer等人,J?Allergy?Clin?Immunol.2008(121):847-852)。

Niemi等人最近的出版物,Structure2007(15):1413-21公開了與β-乳球蛋白(BLG)復(fù)合的IgE?Fab片段的晶體結(jié)構(gòu)。其還顯示了兩個IgE/Fab分子是如何結(jié)合二聚體BLG的以及當與已知IgG表位結(jié)構(gòu)相比較時IgE表位是不同的，為位于β折疊區(qū)中的“扁平”表面。

今天所有過敏性癥狀的治療的趨勢是向著使用過敏原-特異性脫敏作用而非避免過敏原進行耐受性的主動誘導(dǎo)，所述避免過敏原通常是不可能的或僅僅治療癥狀。目前的脫敏療法基于從天然來源純化的過敏原，其中批次間變化可導(dǎo)致與發(fā)現(xiàn)和維持治療的正確劑量和功效相關(guān)的問題。這些問題可導(dǎo)致過敏性副作用和對新過敏原的致敏作用的潛在風(fēng)險。

重組過敏原用于脫敏的用途將消除與批次間變化相關(guān)的不利方面，并且最早的重組過敏原處于臨床試驗中(Valenta等人,Annu?Rev?Immunol2010(28):211-41)。這樣的過敏原在臨床中的效率從而仍待觀察。一些修飾重組過敏原已被報導(dǎo)。

國際專利公布WO02/40676和WO03/096869公開了樺樹花粉過敏原Bet?v1的許多突變體形式。這些突變體通過在基于Bet?v1多肽的保守表面結(jié)構(gòu)的序列分析的假定的IgE結(jié)合位點引入隨機突變來產(chǎn)生。WO?03/096869公開了過敏原表面上的不同“小簇(group)”上的4個主要突變的用途。

國際專利公布WO2007/073907公開了在氨基酸位置54、115或123上包含3個氨基酸置換或缺失的Bet?v1多肽。沒有證據(jù)表明這些突變體具有減小的組胺釋放能力。

國際專利公布WO?2009/024208公開了在氨基酸100-125的區(qū)域中具有至少4個突變的Bet?v1突變體。然而，由于所述突變，多肽的三維結(jié)構(gòu)喪失了，并且無報導(dǎo)的活性。

國際專利公布WO?2008/092992公開了通過修飾非連續(xù)致敏性表位（即致敏性物質(zhì)上具有的區(qū)域的扁平表面）上的氨基酸殘基來阻斷致敏性物質(zhì)的I型表面相互作用的方法，并且提示可相應(yīng)地制備低過敏原性樺樹花粉蛋白。