[發明專利]通過離子型表面活性劑選擇性裂解細胞

有效

• 申請號: 201280021127.0
• 申請日: 2012-04-30
• 公開（公告）號: CN103518132A
• 公開（公告）日: 2014-01-15
• 發明（設計）人: 伊雷妮·多伯拉爾;西格林德·尼爾肯;保羅·凡德維爾;巴特·凡米爾伯根;羅埃爾·彼得曼
• 申請（專利權）人: 比奧卡爾齊什股份有限公司
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50;C12N5/00
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司 11262
• 代理人: 陳建芳;閻娬斌

1.一種用于選擇性裂解在含有或疑似含有微生物的樣品內的真核細胞的方法，所述方法包括以下步驟：

-a）提供一種含有或疑似含有微生物的具有真核細胞的樣品，

-b）向所述樣品添加一種離子型表面活性劑和一種緩沖劑，以獲得具有大約9.0或更高的pH的溶液，

-c）孵育所述溶液持續充分長到足以裂解這些真核細胞的時間段。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述樣品是一種哺乳動物血樣。

3.根據權利要求2所述的方法，其中所述血樣是全血。

4.根據權利要求1到3中任一項所述的方法，其中所述微生物選自下組，該組由以下各項組成：細菌和真菌。

5.根據權利要求1到4中任一項所述的方法，其中所述孵育步驟c）進行30秒到10分鐘。

6.根據權利要求1到5中任一項所述的方法，其中所添加洗滌劑和所添加緩沖劑的體積與樣品體積之間的比率在2/1與1/10之間。

7.根據權利要求1到6中任一項所述的方法，其中該離子洗滌劑是是以0.1%到5%（w/v%或v/v%）濃度在溶液中存在。

8.根據權利要求1到7中任一項所述的方法，其中該離子型表面活性劑選自下組，該組由以下各項組成：陰離子型表面活性劑和陽離子型表面活性劑，該陰離子型表面活性劑優選地選自下組，該組由以下各項組成：烷基硫酸鹽、烷基醚硫酸鹽、多庫酯鹽、磺酸鹽氟表面活性劑、烷基苯磺酸鹽、烷基芳基醚磷酸鹽、烷基醚磷酸鹽、烷基羧酸鹽以及羧酸鹽氟表面活性劑，更優選地選自下組，該組由以下各項組成：十二烷基硫酸銨、十二烷基硫酸鈉（SDS）、脫氧膽酸鈉、正十二烷基苯磺酸鈉、十二烷基醚硫酸鈉（SLES）、肉豆蔻醇聚醚硫酸鈉、琥珀酸二異辛酯磺酸鈉、全氟辛烷磺酸鹽（PFOS）、全氟丁烷磺酸鹽、硬脂酸鈉、月桂酰肌氨酸鈉、全氟壬酸鹽以及全氟辛酸鹽（PFOA或PFO），并且該陽離子型表面活性劑優選地選自下組，該組由以下各項組成：十六烷基三甲基溴化銨（CTAB）、十六烷基三甲基氯化銨（CTAC）、氯化十六烷基吡啶（CPC）、牛油胺聚氧乙烯醚（POEA）、苯扎氯銨（BAC）、芐索氯銨（BZT）、5-溴-5-硝基-1,3-二噁烷、雙十八烷基二甲基氯化銨以及雙十八烷基二甲基溴化銨（DODAB）。

9.根據權利要求8所述的方法，其中該離子型表面活性劑是十二烷基硫酸鈉（SDS）。

10.根據權利要求1到9中任一項所述的方法，進一步包括離心所述孵育溶液和分離所述微生物的步驟。

11.根據權利要求1到9中任一項所述的方法，進一步包括在過濾器上過濾所述孵育溶液的步驟，該過濾器具有將微生物保留在所述過濾器上的孔徑。

12.根據權利要求1到11中任一項所述的方法，進一步包括裂解所述微生物的步驟。

13.根據權利要求1到12中任一項所述的方法，進一步包括基于核酸的分子檢測。

14.一種包含用于選擇性裂解在含有或疑似含有微生物的樣品內的真核細胞并檢測所述微生物的成套試劑盒，該成套試劑盒至少包含堿性緩沖劑和離子型表面活性劑。

15.一種用于檢測在樣品中的微生物的裝置（1），包括：

-一個用于接受具有在1ml與20ml之間的體積的樣品流體的裂解室（2），

-一個包含具有大約9.0或更高的pH的堿性緩沖劑并且包含離子型表面活性劑的貯器（3），或者一個包含具有大約9.0或更高的pH的堿性緩沖劑的貯器（31）和一個包含離子型表面活性劑的貯器（32），所述貯器連接到裂解室（2），

-一個連接到裂解室（2）以用于在裂解之后過濾該樣品的過濾器（4），所述過濾器（4）具有將細菌保留在該過濾器上的孔徑，以及

-一個用于分析DNA的存在的檢測室（5）。

16.根據權利要求15所述的裝置，其中該堿性緩沖劑具有高于9.0的pKa且/或該離子型表面活性劑是十二烷基硫酸鈉。