[發明專利]防止細胞轉化和癌癥轉移的組合物和方法

無效

• 申請號: 201280018703.6
• 申請日: 2012-02-17
• 公開（公告）號: CN103477225A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發明（設計）人: R·塞立昂;M·安東雅克;W·K·塞立昂;李波
• 申請（專利權）人: 康奈爾大學
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53
• 代理公司: 北京萬慧達知識產權代理有限公司 11111
• 代理人: 白華勝;段曉玲

相關申請的交叉引用

本申請要求2011年2月17日提交的申請號為61/443,978的美國臨時專利申請的優先權，其公開的內容通過引用并入本文。

發明領域

本發明一般地涉及癌癥的診斷和治療，更具體地涉及基于從癌細胞上脫落的微泡的新型癌癥標記物和療法。

發明背景

腫瘤進展涉及癌細胞在其微環境中彼此間以及與鄰近的正常細胞之間相互溝通的能力。來源于人體癌細胞的微泡（MV）已受到關注，因為其明顯能夠參與信號蛋白在癌細胞之間的水平轉移，并且促進癌細胞的侵襲活性。不同類型的高級或侵襲形式的人癌細胞釋放MV至其周圍環境，這已越來越多的被認為是一種腫瘤生物學的特征。然而，對這些結構是如何產生的及其在癌癥進展中的重要性目前仍知之甚少。因此，探索MV在癌癥中迄今為止尚未被確認的作用，并利用這些作用開發涉及診斷方法和治療干涉的組合物和方法具有持續和尚未滿足的需求。本發明滿足了這些需求。

發明簡述

本發明部分地基于我們的發現，即在微泡（MV）介導的正常細胞轉化中，從癌細胞脫落的（MV）必需包含組織谷氨酰胺轉移酶（tTG）。在這方面，我們發現從多種類型的人癌細胞上脫落的MV都能夠賦予正常細胞（以成纖維細胞和上皮細胞為代表的非癌細胞）轉化的表型，通過類似存活能力的增強和錨定非依賴性生長，能夠證明這種轉化表型。我們還發現tTG本身不足以轉化正常細胞。相反，tTG必需和一種與其相結合和交聯的蛋白（纖連蛋白（FN））一起參與到正常細胞的轉化過程中。因而，本發明的一個方面是鑒定具有誘導細胞轉化能力的MV，所述轉化依賴于tTG的存在。在另一個方面，本發明提供了通過調節與微泡相結合的tTG的作用來抑制誘導正常細胞轉化的方法。

在一個實施方式中，本發明提供了一種表征微泡的方法。所述方法包括獲取含有微泡的樣品和檢測微泡中的tTG。基于對MV的檢測確定MV是否含有tTG和/或交聯的FN，如果在樣品中存在與微泡相結合的tTG則將所述MV鑒定為tTG陽性，相反，如果在樣品中不存在與微泡相結合的tTG則將所述微泡鑒定為tTG陰性。在另一個實施方式中，所述方法包括檢測tTG陽性微泡的存在情況。所述方法包括獲取樣品和對所述樣品進行分析以檢測與tTG結合的微泡的存在情況。在另一個實施方式中，所述方法包括獲取含有微泡的樣品，并對所述微泡進行檢測以確定其是否包含交聯的FN。如果樣品中存在與微泡相結合的交聯FN則將所述MV鑒定為交聯FN陽性，相反如果樣品中不存在與微泡相結合的交聯FN則將所述微泡鑒定為交聯FN陰性。

所述方法適于分析含有MV的任意樣品。在一個實施方式中，所述樣品包括來自診斷為患有癌癥、疑似患有癌癥、或存在癌癥風險的個體的液體生物樣品。在一個實施方式中，所述樣品來自正在接受癌癥治療的個體。

本發明的一個方面包括將個體診斷為具有循環微泡的方法，所述循環微泡為tTG和/或交聯的FN陽性或者tTG和/或交聯的FN陰性。所述方法包括檢測來自個體的樣品中的與微泡相結合的tTG和/或交聯的FN，如果分別存在tTG和/或交聯的FN，則將所述個體鑒定為具有與tTG和/或交聯的FN相結合的循環微泡，如果均不存在與微泡相結合的tTG和/或交聯的FN，則將所述個體鑒定為不具有與tTG和/或交聯的FN相結合的循環微泡。

在不同實施方式中，檢測所述微泡包括采用任意適合的技術從液體生物樣品中分離微泡。在一個實施方式中，分離所述MV包括使用結合配體捕獲。可以使用能夠選擇性結合tTG或FN，或者選擇性結合包括tTG和FN的復合物的任意試劑。在某些實施方式中，所述結合配體選自FN、抗-FN抗體或其抗體結合片段或衍生物、重組tTG和經修飾的tTG、tTG或經修飾的tTG的片段、抗-tTG抗體或其抗體結合片段或衍生物、以及上述試劑的組合。可以使用任意適合的技術和試劑檢測是否存在tTG。在不同實施方式中，可以使用上述結合配體中的一種或組合進行檢測，其中所述結合配體已被檢測標記和/或附著于基質上。

在另一個方面，本發明包括從樣品中分離膜結構的方法。該實施方式包括提供可能含有所述膜結構的樣品并將所述樣品與tTG或其衍生物混合，如果樣品中存在所述膜結構，則允許其形成膜結構與tTG或其衍生物的復合物。如果存在所述膜結構，將所述tTG和膜結構的復合物與樣品的其余部分分離。