[發明專利]用于抗原特異性T細胞增殖的方法

有效

• 申請號: 201280018193.2
• 申請日: 2012-04-12
• 公開（公告）號: CN103502439B
• 公開（公告）日: 2016-10-12
• 發明（設計）人: 亞歷克斯·卡爾松-帕拉;安娜-卡林·瓦爾格倫;本特·安德松
• 申請（專利權）人: 因繆尼卡姆股份公司
• 主分類號: C12N5/0784
• 分類號: C12N5/0784;C12N5/0783
• 代理公司: 北京邦信陽專利商標代理有限公司 11012
• 代理人: 楊敬

技術領域

本發明涉及免疫學和癌癥治療領域，更具體地涉及一種活化遺傳修飾的抗原特異性T細胞的方法及由所述方法制備的遺傳修飾的T細胞。

背景技術

T細胞識別腫瘤或感染細胞并且通過殺傷這些靶細胞防止疾病的發作。然而，腫瘤或病原體與免疫系統的相互作用是復雜的，這通過在存在特異性T細胞時癌癥或慢性感染發展，從而病原體或腫瘤明顯地可以逃避T細胞監視得到證實。

事實上T細胞檢測任何致病入侵者的能力是由其非常多樣的受體庫賦予的，受體庫允許T細胞池識別由主要組織相容性復合體（MHC）分子遞呈的大量的肽。而且，通過T細胞受體（TCR）(信號1)的信號轉導不足以產生充分的T細胞活化，因為共刺激分子提供了用于增殖、存活和分化所不可缺少的信號（信號2）。實際上，僅接受信號1而沒有信號2的原初T細胞被認為是無活動力（非反應）的或通過細胞凋亡而死亡。完全的T細胞活化需要信號1和2共同起作用，并且這些信號的強度決定了接著產生的T細胞池的大小。而且，完全分化為效應T細胞通常依賴于第三信號，其由抗原呈遞細胞（APC）以可溶性形式提供，并提供用于需要的效應T細胞類型的指導性信號。這個“三個信號”的概念描述了用于活化原初T細胞以及隨后形成效應T細胞的模型。然而，免疫系統提供了大量多種共刺激分子并且這些多種類型的信號2和3均以其獨特的方式有助于T細胞反應的質量。共刺激分子和可溶性形式的信號3可作用于T細胞活化的特定方面，如存活、細胞周期進程、待發展的效應細胞的類型和分化成效應細胞或記憶細胞。

現在普遍接受了成熟的抗原呈遞樹突細胞（DC）需要由其它淋巴細胞，包括CD4⁺T細胞、NK細胞和NKT細胞“輔助”，以誘導長期生存的記憶CD8⁺T細胞。這種“輔助”誘導所述成熟DC進一步分化，這個過程稱為激活（licensing）。“輔助”信號對DC有多種作用，包括上調共刺激分子、分泌細胞因子和上調多種抗細胞凋亡分子，這些都累積性地增強DC最佳活化同源T細胞，特別是CD8⁺T細胞的能力。而且，“輔助”淋巴細胞也可表達或分泌直接影響T細胞存活、細胞周期進程、待發展的效應細胞類型和分化成效應細胞或記憶細胞的因子。

用于對抗慢性感染或侵襲性癌癥的一個策略是過繼T細胞治療，其涉及將效應T細胞轉移以恢復宿主中的特異性T細胞反應。最近獲得需要的特異性的T細胞的技術發展對于在不同臨床環境下使用過繼T細胞治療已經引起了越來越大的興趣。過繼細胞轉移治療是施用間接體內活化并擴增的自體腫瘤反應性T細胞。在癌癥治療中使用過繼細胞轉移治療有幾個潛在優點。腫瘤特異性T細胞可以在間接體內被活化并擴增至大的數量，而不依賴于腫瘤的免疫原性，并且在過繼轉移前可以對T細胞的功能和表型性質進行選擇。

過繼轉移后，對于T細胞必需發生幾個事件以引起確定的腫瘤的衰退。更具體而言：T細胞必需通過抗原特異性再刺激在體內被活化，然后T細胞必需被擴增至能夠引起顯著的腫瘤負荷破壞的水平，抗腫瘤細胞必需存活足夠長時間以完成所有腫瘤細胞的消除。

以前，用于選擇過繼轉移至實體瘤患者的細胞的標準是在共培養后抗腫瘤T細胞釋放IFN-γ并殺傷腫瘤細胞的能力。然而，現在明白了僅僅這些標準不能預測體內效力。Gattinoni等,J.Clin.Invest.115:1616-1626(2005)發現：獲得完全效應子性質并且在體外顯示增強的抗腫瘤反應性的CD8⁺T細胞在體內引發腫瘤衰退和治愈中效果較差。

根據現有技術的方法需要一次或多次再刺激以達到腫瘤特異性細胞毒性T細胞的臨床相關水平。參見例如Ho等(Journal?of?Immunological?Methods,310(2006),40-50)和Gritzapis等(J.Immunol.,2008;181;146-154)，其中需要再刺激1-2次以達到約19%的腫瘤特異性CD8⁺T細胞水平。再刺激使得細胞活性降低并接近細胞凋亡。