[發明專利]由免疫復合物直接對微生物進行測序的測定法與方法

無效

• 申請號: 201280015562.2
• 申請日: 2012-01-26
• 公開（公告）號: CN103635591A
• 公開（公告）日: 2014-03-12
• 發明（設計）人: 阿瑟·卡澤爾;理查德·布隆伯格
• 申請（專利權）人: 布里格姆及婦女醫院股份有限公司;因斯布魯克醫科大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;G01N33/68;C07K1/14;G01N33/569
• 代理公司: 北京信慧永光知識產權代理有限責任公司 11290
• 代理人: 張淑珍;楊國強

1.一種用于在患有疾病或失調的患者中對免疫刺激性微生物的存在進行識別或檢測的方法，所述方法包括下列步驟：

（a）由患者樣品制備免疫蛋白富集部分；

（b）由所述免疫蛋白富集部分提取核酸；

（c）對提取的核酸進行測序；以及

（d）將所述提取的核酸的序列與已知的微生物核酸序列進行比較，以識別由所述免疫蛋白富集部分提取的核酸是否為微生物核酸，其中，若所述提取的核酸為微生物核酸，則所述患者被檢測為具有免疫刺激性微生物。

2.一種用于在患有疾病或失調的患者中對免疫刺激性微生物的存在進行識別或檢測的方法，所述方法包括下列步驟：

（a）由從患者樣品獲得的免疫蛋白富集部分中提取核酸；

（b）對提取的核酸進行測序；以及

（c）將所述提取的核酸的序列與已知的微生物核酸序列進行比較，以識別由所述免疫蛋白富集部分提取的核酸是否為微生物核酸，其中，若所述提取的核酸為微生物核酸，則所述患者被檢測為具有免疫刺激性微生物。

3.如權利要求1或2所述的方法，其中，所述患有疾病或失調的患者患有炎癥性腸病。

4.如權利要求3所述的方法，其中，所述炎癥性腸病為Crohn′s病、潰瘍性結腸炎、膠原性結腸炎、淋巴細胞性結腸炎、缺血性結腸炎、改道性結腸炎、Behcet′s綜合征或未定型結腸炎。

5.如權利要求1-4中任一項所述的方法，其中，所述患有疾病或失調的患者患有自身免疫失調。

6.如權利要求1-5中任一項所述的方法，其中，所述患有疾病或失調的患者患有硬化、敗血癥或病毒血癥。

7.如權利要求1-6中任一項所述的方法，其中，所述免疫蛋白富集部分通過使用對免疫球蛋白、補體蛋白或病原體識別受體具有特異性的親和結合劑制備。

8.如權利要求1-7中任一項所述的方法，其中，所述免疫蛋白富集部分通過使用對IgA、IgD、IgE、IgG、IgM具有特異性的親和結合劑或所述親和結合劑的任意組合制備。

9.如權利要求1-8中任一項所述的方法，其中，所述免疫蛋白富集部分通過使用對IgG具有特異性的親和結合劑制備。

10.如權利要求1-9中任一項所述的方法，其中，所述免疫蛋白富集部分通過使用親和結合劑利用免疫沉淀制備。

11.如權利要求7-10中任一項所述的方法，其中，所述親和結合劑為蛋白A、蛋白G、蛋白A/G、蛋白L、免疫蛋白特異性抗體或其片段，或所述親和結合劑的任意組合。

12.如權利要求7-11中任一項所述的方法，其中，所述親和結合劑或免疫蛋白特異性抗體包括抗人IgG抗體、抗人IgA抗體、抗人IgD抗體、抗人IgE抗體、抗人IgM抗體，或所述親和結合劑或抗體的任意組合。

13.如權利要求7-12中任一項所述的方法，其中，所述親和結合劑對免疫球蛋白免疫蛋白具有特異性，并結合至所述免疫球蛋白免疫蛋白的Fc片段上的抗原表位。

14.如權利要求7-13中任一項所述的方法，其中，所述親和結合劑未結合至固相載體。

15.如權利要求7-13中任一項所述的方法，其中，所述親和結合劑結合至固相載體。

16.如權利要求15所述的方法，其中，所述固相載體包括超順磁微珠、微尺度瓊脂糖珠、或瓊脂糖樹脂珠。

17.如權利要求1-16中任一項所述的方法，其中，被檢測的所述免疫系統刺激性微生物為細菌、真菌或病毒。

18.如權利要求1-17中任一項所述的方法，其中，被檢測的所述免疫系統刺激性微生物屬于分類單元中的古細菌域、細菌域或真核生物域。

19.如權利要求1-18中任一項所述的方法，其中，所述患者樣品為血液樣品、血漿樣品、尿樣品、腦脊液樣品、粘膜樣品、糞便樣品、腸灌洗樣品、腸液樣品、關節液樣品、呼吸道痰樣品或支氣管肺泡灌洗液樣品。

20.如權利要求19所述的方法，其中，所述腸灌洗樣品為回腸灌洗樣品。