[發明專利]纖維素酶組合物和使用相同組合物用于改善木質纖維素生物質轉化成可發酵糖的方法

在審

• 申請號: 201280013801.0
• 申請日: 2012-03-16
• 公開（公告）號: CN103492561A
• 公開（公告）日: 2014-01-01
• 發明（設計）人: T·卡佩爾;I·尼古拉耶夫;S·蘭茨;M·K·福達拉;M·Y·席
• 申請（專利權）人: 丹尼斯科美國公司
• 主分類號: C12N9/42
• 分類號: C12N9/42;C12P19/14;C12N15/80;D06M16/00
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 張莉;黃革生

1.一種分離的多肽，其包含：

a)與SEQ?ID?NO:135具有至少約70%同一性的氨基酸序列；或者

b)N末端序列和C末端序列，其中所述N末端序列包含衍生自第一β-葡糖苷酶的第一氨基酸序列，長度為至少200個殘基，并且包含SEQ?ID?NOs:164-169的一種或多種或全部，并且其中所述C末端序列包含衍生自第二β-葡糖苷酶的第二氨基酸序列，長度為至少50個殘基，并且包含SEQ?ID?NO:170，

其中所述多肽具有β-葡糖苷酶活性。

2.根據權利要求1所述的分離的多肽，其包含與SEQ?ID?NO:135具有至少約80%同一性的氨基酸序列。

3.根據權利要求1或2中任一項所述的分離的多肽，其包含與SEQ?ID?NO:135具有至少約90%同一性的氨基酸序列。

4.根據權利要求1所述的分離的多肽，其包含衍生自第一β-葡糖苷酶的N末端序列和衍生自第二β-葡糖苷酶的C末端序列，其中所述第一β-葡糖苷酶和所述第二β-葡糖苷酶彼此不同。

5.根據權利要求1或4所述的分離的多肽，其中所述N末端序列和所述C末端序列并不直接連接，而是通過接頭結構域功能性地連接。

6.根據權利要求5所述的分離的多肽，其中所述N末端序列、所述C末端序列或所述接頭結構域包含長度為3、4、5、6、7、8、9、10或11個氨基酸殘基的環區序列，所述環區序列包含SEQ?ID?NO:171或172的氨基酸序列。

7.根據權利要求1-6中任一項所述的分離的多肽，其與第一β-葡糖苷酶或第二β-葡糖苷酶相比具有改善的穩定性。

8.根據權利要求7所述的分離的多肽，其中所述改善的穩定性是在儲存條件或生產條件下增加的蛋白水解切割抵抗性。

9.根據權利要求4-8中任一項所述的分離的多肽，其中所述N末端序列包含與SEQ?ID?NO:54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78或79的等長度序列具有至少90%序列同一性的氨基酸序列，其中所述C末端序列包含SEQ?ID?NO:170的序列基序。

10.根據權利要求4-8中任一項所述的分離的多肽，其中所述N末端序列包含SEQ?ID?NOs:164-169的序列基序的一種或多種或全部，并且所述C末端序列包含與SEQ?ID?NO:54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78或79的等長度序列具有至少90%序列同一性的氨基酸序列。

11.根據權利要求9或10所述的分離的多肽，其中所述N末端序列接在SEQ?ID?NOs:136-148的序列基序中的3種或更多種、4種或更多種、5種或更多種之后，并且其中所述C末端序列接在SEQ?ID?NOs:149-156的序列基序中的2種或更多種、3種或更多種、4種或更多種之后。

12.一種組合物，其包含根據權利要求1-11中任一項所述的分離的多肽。

13.根據權利要求12所述的組合物，其還包含一種或多種纖維素酶。

14.根據權利要求13所述的組合物，其中所述一種或多種纖維素酶選自內切葡聚糖酶、GH61/內切葡聚糖酶、纖維二糖水解酶和其他β-葡糖苷酶。

15.根據權利要求12-14中任一項所述的組合物，其中所述組合物還包含一種或多種半纖維素酶。

16.根據權利要求15所述的組合物，其中所述一種或多種半纖維素酶選自木聚糖酶、β-木糖苷酶或L-α-阿拉伯呋喃糖苷酶。

17.根據權利要求12-16中任一項所述的組合物，其中所述β-葡糖苷酶以相對于所述組合物中蛋白質的總量的1重量%至75重量%的量存在。

18.根據權利要求12-17中任一項所述的組合物，其為培養物混合物或發酵液。

19.根據權利要求18所述的組合物，其為全發酵液制劑。