[發(fā)明專利]具有纖維素水解增強(qiáng)活性的多肽及其編碼多核苷酸

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201280010414.1
• 申請(qǐng)日: 2012-02-23
• 公開（公告）號(hào): CN103384678B
• 公開（公告）日: 2017-01-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張羽;段俊欣;湯嵐;吳文平
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 諾維信股份有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/37
• 分類號(hào): C07K14/37;C12N15/56;C12N15/63;C12P19/00;A01H1/00
• 代理公司: 北京坤瑞律師事務(wù)所11494
• 代理人: 史悅

1.一種具有纖維素分解增強(qiáng)活性的分離的多肽，其選自下組：

(a)多肽，其與SEQ?ID?NO:2的成熟多肽具有至少70%序列同一性，或與SEQ?ID?NO:4的成熟多肽具有至少60%序列同一性，或與SEQ?ID?NO:6的成熟多肽具有至少70%序列同一性；

(b)多肽，其由這樣的多核苷酸編碼，所述多核苷酸在至少中等嚴(yán)格條件下與以下雜交：(i)SEQ?ID?NO:1、SEQ?ID?NO:3或SEQ?ID?NO:5的成熟多肽編碼序列，(ii)包含于SEQ?ID?NO:1、SEQ?ID?NO:3或SEQ?ID?NO:5的成熟多肽編碼序列中的cDNA序列，或(iii)(i)或(ii)的全長(zhǎng)互補(bǔ)鏈；

(c)多肽，其由這樣的多核苷酸編碼，所述多核苷酸與SEQ?ID?NO:1的成熟多肽編碼序列或其cDNA序列具有至少70%序列同一性，或與SEQ?ID?NO:3的成熟多肽編碼序列或其cDNA序列具有至少60%序列同一性，或與SEQ?ID?NO:5的成熟多肽編碼序列或其cDNA序列具有至少70%序列同一性；

(d)SEQ?ID?NO:2、SEQ?ID?NO:4或SEQ?ID?NO:6的成熟多肽的包含一個(gè)或多個(gè)(例如幾個(gè))氨基酸的取代、缺失和/或插入的變體；和

(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的具有纖維素分解增強(qiáng)活性的片段。

2.權(quán)利要求1的多肽，其包含或組成為SEQ?ID?NO:2、SEQ?ID?NO:4或SEQ?ID?NO:6的氨基酸序列或SEQ?ID?NO:2、SEQ?ID?NO:4或SEQ?ID?NO:6的成熟多肽；或其具有纖維素分解增強(qiáng)活性的片段。

3.權(quán)利要求1的多肽，其由下述質(zhì)粒中包含的多核苷酸所編碼：大腸桿菌CGMCC4601中所含的質(zhì)粒pGH61_664，大腸桿菌CGMCC4602中所含的質(zhì)粒pGH61_1590，或大腸桿菌CGMCC4600中所含的質(zhì)粒pGH61_4950。

4.一種分離的多核苷酸，其編碼權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)的多肽。

5.一種產(chǎn)生權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的多肽的方法，其包括：

(a)在有助于所述多肽產(chǎn)生的條件下培養(yǎng)細(xì)胞，所述細(xì)胞以其野生型形式產(chǎn)生所述多肽；和

(b)回收所述多肽。

6.一種產(chǎn)生具有纖維素分解增強(qiáng)活性的多肽的方法，其包括：

(a)在有助于所述多肽產(chǎn)生的條件下培養(yǎng)重組宿主細(xì)胞，所述重組宿主細(xì)胞包含權(quán)利要求4的多核苷酸；和

(b)回收所述多肽。

7.一種產(chǎn)生親本細(xì)胞的突變體的方法，其包括破壞或缺失編碼權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)的多肽的多核苷酸或其部分，導(dǎo)致突變體與親本細(xì)胞相比產(chǎn)生較少的所述多肽。

8.一種產(chǎn)生權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)的多肽的方法，其包括：

(a)在有助于所述多肽產(chǎn)生的條件下培養(yǎng)轉(zhuǎn)基因植物或植物細(xì)胞，所述植物或植物細(xì)胞包含編碼所述多肽的多核苷酸；和

(b)回收所述多肽。

9.用編碼權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)的多肽的多核苷酸轉(zhuǎn)化的轉(zhuǎn)基因植物、植物部分或植物細(xì)胞。

10.一種雙鏈抑制RNA(dsRNA)分子，其包含權(quán)利要求4的多核苷酸的亞序列，其中該dsRNA任選地為siRNA或miRNA分子。

11.一種抑制具有纖維素分解增強(qiáng)活性的多肽在細(xì)胞中表達(dá)的方法，其包括對(duì)細(xì)胞施用或者在細(xì)胞中表達(dá)權(quán)利要求10的雙鏈抑制RNA(dsRNA)分子。

12.一種分離的多核苷酸，其編碼信號(hào)肽，所述信號(hào)肽包含或組成為SEQ?ID?NO:2的氨基酸1至22，SEQ?ID?NO:4的氨基酸1至21，或SEQ?ID?NO:6的氨基酸1至22。

13.一種產(chǎn)生蛋白的方法，其包括：

(a)在有助于所述蛋白產(chǎn)生的條件下培養(yǎng)重組宿主細(xì)胞，所述宿主細(xì)胞包含與權(quán)利要求12的多核苷酸可操作地連接的編碼所述蛋白的基因，其中所述基因?qū)τ谒龆嗪塑账崾峭庠吹模缓?/p>

(b)回收所述蛋白。

14.一種組合物，其包含權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)的多肽。

15.權(quán)利要求14的組合物，其為纖維素分解酶組合物或去污劑組合物。