[發(fā)明專(zhuān)利]含有酪氨酸氧化物偶聯(lián)的生物材料的用于檢測(cè)蛋白質(zhì)的組合物

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201280006468.0
• 申請(qǐng)日: 2012-01-20
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103339510A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-10-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 林國(guó)鎮(zhèn);林鎮(zhèn)翊;金范俊;劉京和;樸壽正
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 普默特株式會(huì)社
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/68
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/68;G01N33/58;G01N33/53
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專(zhuān)利商標(biāo)代理有限公司 32200
• 代理人: 樓高潮

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種用于檢測(cè)蛋白質(zhì)的組合物，其中所述組合物包含酪氨酸氧化物偶聯(lián)的生物材料。

背景技術(shù)

隨著時(shí)間的推移，不斷開(kāi)發(fā)了各種診斷人類(lèi)疾病的方法。最近，在相關(guān)領(lǐng)域中采用了最先進(jìn)的成像技術(shù)并對(duì)組織應(yīng)用了三維成像技術(shù)，取得了進(jìn)展。

組織學(xué)分析是最普遍并廣泛使用的疾病的診斷方法。因?yàn)樵摲椒ㄏ鄬?duì)簡(jiǎn)單且試驗(yàn)結(jié)果具有高的再現(xiàn)性和準(zhǔn)確性，所以該方法的對(duì)象和對(duì)該方法的需求不斷地增加。例如，在進(jìn)行腫瘤的外科手術(shù)的手術(shù)室內(nèi)去除腫瘤組織后，如果外周組織中腫瘤轉(zhuǎn)移是顯著的，那么就切除一部分外周組織，通過(guò)組織分析學(xué)，確定該腫瘤是否轉(zhuǎn)移。由于該方法確定獲得的樣品是否是轉(zhuǎn)移的，所以獲得合適的組織是絕對(duì)重要的，因此毫無(wú)選擇只能依賴于熟練的外科醫(yī)生的經(jīng)驗(yàn)。此外，由于上述組織學(xué)分析包括樣品的制備和染色，所以不能夠直接從手術(shù)室獲得分析結(jié)果。因此，迫切需要開(kāi)發(fā)一種能夠克服上述限制、簡(jiǎn)單快速的實(shí)時(shí)檢測(cè)疾病的方法。

作為一種新的分析活體的方法，需要這樣一種方法，其能夠快速檢測(cè)靶標(biāo)而不需要切除組織，染色和活化的幾個(gè)步驟，并且該方法具有關(guān)于靶細(xì)胞或生物活性物質(zhì)的高特異性。通常廣泛使用的組織學(xué)分析包括：在4-10%(v/v)的乙醛溶液中將組織固定24小時(shí)使其變硬，并在乙醇溶液中進(jìn)行脫水；在石蠟溶液中浸沒(méi)該組織，并在60℃熔化2小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間以使得石蠟滲透到上述組織中或冷凍該組織；在冰箱中使用冷凍的樹(shù)脂形成樣品樹(shù)脂塊，其中樣品組織與樹(shù)脂很好地融合；在顯微切片機(jī)中用銳刀片切割具有所需厚度(4-10μm)的切片從而獲得樣品切片，并將該切片附著到載玻片上，該顯微切片機(jī)是一種切片形成裝置；移除并水合樹(shù)脂；最后在樣品切片上進(jìn)行幾個(gè)染色步驟并觀察病理特征(Journal?of?Neuroscience?Methods,26,2,1988,pp129-132;Atherosclerosis,27,3,1977,pp333-338)。

然而，僅用于切除組織的侵入性分析的組織學(xué)分析是相對(duì)復(fù)雜的，因此其不適合用于快速診斷疾病。為了克服這個(gè)問(wèn)題，許多研究人員積極地進(jìn)行了使用生物成像設(shè)備，例如正電子發(fā)射體層攝影(PET)或計(jì)算機(jī)斷層掃描(CT)直接觀察活體內(nèi)組織的研究。然而，該設(shè)備通常是在外科手術(shù)之前使用的診斷設(shè)備，并且不容易用于需要速度的手術(shù)室內(nèi)。此外，該設(shè)備具有關(guān)于材料的生物相容性和外部能源供應(yīng)的問(wèn)題，因此有必要開(kāi)發(fā)一種更加實(shí)用的生物成像技術(shù)。

為了解決上述問(wèn)題，研究了通過(guò)輻射光染色量子點(diǎn)或熒光材料偶聯(lián)的抗體的方法(韓國(guó)專(zhuān)利號(hào)10-877187和10-522086以及韓國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)號(hào)10-2005-58431)。然而，這些參考文獻(xiàn)中披露的材料是合成的金屬粒子或化學(xué)物質(zhì)，其在人體內(nèi)的穩(wěn)定性并未得到證實(shí)，因此其僅能用于體外研究。

因此，迫切需要開(kāi)發(fā)一種簡(jiǎn)單快速的實(shí)時(shí)診斷各種疾病的方法，其能夠解決生物成像技術(shù)的根本問(wèn)題，并且其是十分安全的，能夠用于手術(shù)室，并能替代常規(guī)的組織學(xué)分析。

發(fā)明內(nèi)容

技術(shù)問(wèn)題

本發(fā)明在本發(fā)明的發(fā)明人對(duì)一種能夠替代常規(guī)組織學(xué)分析，并且簡(jiǎn)單快速的實(shí)時(shí)診斷各種疾病的方法的研究中得以完成。本發(fā)明人證實(shí)，存在于生物體內(nèi)的天然顏料酪氨酸氧化物與生物材料結(jié)合，然后所述酪氨酸氧化物偶聯(lián)的生物材料與蛋白質(zhì)結(jié)合以使得蛋白質(zhì)的顏色能夠容易地通過(guò)肉眼或光學(xué)顯微鏡確定。

技術(shù)方案

根據(jù)本發(fā)明的一方面，提供了一種檢測(cè)蛋白質(zhì)的組合物，其含有酪氨酸氧化物偶聯(lián)的生物材料。

有益效果

通過(guò)簡(jiǎn)單的檢測(cè)根據(jù)本發(fā)明的含有酪氨酸氧化物偶聯(lián)的生物材料的用于鑒別蛋白質(zhì)的組合物，通過(guò)鑒定結(jié)合酪氨酸氧化物偶聯(lián)的生物材料的蛋白質(zhì)的顏色，可以容易而快速的診斷各種疾病，其中所述酪氨酸氧化物偶聯(lián)的生物材料通過(guò)生物體內(nèi)存在的天然顏料酪氨酸氧化物與生物材料結(jié)合而制備。因此，本發(fā)明的組合物可以在手術(shù)室內(nèi)，簡(jiǎn)單而快速的實(shí)時(shí)診斷各種疾病，并可以有效的取代常規(guī)的組織學(xué)分析而不需要二級(jí)抗體反應(yīng)和顏色表達(dá)的最終操作。

附圖說(shuō)明

圖1是通過(guò)本發(fā)明[(甲)實(shí)施例1、(乙)實(shí)施例2和(丙)實(shí)施例3]的斑點(diǎn)印跡法使用黑色素偶聯(lián)的抗體鑒定蛋白質(zhì)顏色的圖表；和

圖2是根據(jù)抗原的濃度[(甲)0.1ng/μl、(乙)0.025μg/μl、(丙)0.05μg/μl、(丁)0.1μg/μl和(戊)0.2μg/μl]，通過(guò)斑點(diǎn)印跡法使用常規(guī)的二級(jí)抗體鑒定蛋白質(zhì)顏色的圖表。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明提供了一種用于檢測(cè)蛋白質(zhì)的組合物，所述組合物包含酪氨酸氧化物偶聯(lián)的生物材料。