[實(shí)用新型]一種快速檢測(cè)飼料中玉米赤霉烯酮的膠體金試劑板

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201220702189.5
• 申請(qǐng)日: 2012-11-30
• 公開（公告）號(hào): CN202939174U
• 公開（公告）日: 2013-05-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李翹;陳笑笑;桑麗雅;王振國
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 杭州南開日新生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/577
• 分類號(hào): G01N33/577;G01N33/558;G01N33/544;G01N33/532
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本實(shí)用新型涉及一種快速檢測(cè)飼料中玉米赤霉烯酮的膠體金試劑板，具體涉及一種檢測(cè)玉米赤霉烯酮的免疫膠體金快速檢測(cè)試劑板。

背景技術(shù)

玉米赤霉烯酮(zearalenone，ZEN)又稱F-2毒素，首先從有赤霉病的玉米中分離得到。其產(chǎn)毒菌主要是鐮刀菌屬(Fusarium)的菌侏，如禾谷鐮刀菌(F.graminearum)和三線鐮刀菌(F.tricinctum)。玉米赤霉烯酮的耐熱性較強(qiáng)，110℃下處理1h才被完全破壞。玉米赤霉烯酮主要污染玉米、小麥、大米、大麥、小米和燕麥等谷物，其中玉米的陽性檢出率為45％，最高含毒量可達(dá)到2909mg/kg；小麥的檢出率為20％，含毒量為0.364～11.05mg/kg。玉米赤霉烯酮具有雌激素作用，主要作用于生殖系統(tǒng)，可使家畜、家禽和實(shí)驗(yàn)小鼠產(chǎn)生雌性激素亢進(jìn)癥。妊娠期的動(dòng)物(包括人)食用含玉米赤霉烯酮的食物可引起流產(chǎn)、死胎和畸胎。食用含赤霉病麥面粉制作的各種面食也可引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)的中毒癥狀，如惡心、發(fā)冷、頭痛、神智抑郁和共濟(jì)失調(diào)等。

玉米赤霉烯酮的危害已引起很多國家的重視，部分國家已制定了谷物中玉米赤霉烯酮的限量標(biāo)準(zhǔn)。如澳大利亞規(guī)定牛飼料中玉米赤霉烯酮的允許量≤150μg/kg；俄羅斯規(guī)定谷物、植物油、堅(jiān)果中的允許量≤1000μg/kg；法國規(guī)定谷物、植物油中的允許量≤200μg/kg；巴西規(guī)定玉米中的允許量≤200μg/kg；我國GB13078.2-2006“飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)飼料中赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的允許量”規(guī)定配合飼料、玉米中的允許量≤500μg/kg。

目前，一般采取薄層層析法、液相和氣相色譜法、酶聯(lián)免疫法等方法對(duì)玉米赤霉烯酮進(jìn)行測(cè)定。薄層層析法方法簡(jiǎn)單，但其靈敏度較低；而液相和氣相色譜等檢測(cè)方法的靈敏度雖然很高，但方法較為復(fù)雜，對(duì)儀器的要求也很高。另外，也可從分子生物學(xué)的角度進(jìn)行分析，測(cè)定的范圍在5～100μg/mL。上述方法各有其優(yōu)點(diǎn)，但是對(duì)于戶外、現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)仍然不能滿足，因此需要借助于免疫膠體金層析技術(shù)。

膠體金免疫層析法是在免疫滲濾技術(shù)的基礎(chǔ)上建立的一種簡(jiǎn)易快速的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)，除了具備酶聯(lián)免疫法的諸多優(yōu)點(diǎn)外，還克服了酶聯(lián)免疫法的一些不足。該方法將反應(yīng)所需要的原料的全部或大部分均已整合到試劑中，反應(yīng)通常只需數(shù)分鐘至數(shù)十分鐘，檢測(cè)結(jié)果以肉眼可見的顯色條帶來判讀。此法具有簡(jiǎn)便快速、操作簡(jiǎn)單、特異性強(qiáng)、不需要額外設(shè)備等優(yōu)點(diǎn)，現(xiàn)已被廣泛應(yīng)用于生物技術(shù)的諸多領(lǐng)域。

實(shí)用新型內(nèi)容

本實(shí)用新型針對(duì)飼料中的玉米赤霉烯酮?dú)埩糸_展研究，提供一種用于現(xiàn)場(chǎng)快速篩選玉米赤霉烯酮陽性飼料樣本的免疫膠體金快速檢測(cè)試劑板。本實(shí)用新型具有簡(jiǎn)單、快速、靈敏度高等特點(diǎn)，無須儀器設(shè)備配合測(cè)定。檢測(cè)過程不受地點(diǎn)限制，既可在實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行，也可進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)測(cè)定，15min左右即可完成對(duì)樣品中玉米赤霉烯酮的定性和半定量測(cè)定。

本試劑板由上下兩塊塑料模板和背襯組成，背襯上依次緊密粘貼著樣品墊、膠體金結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊。在樣品墊、膠體金結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊相鄰的地方有1～2mm的重疊，一方面是為了保證層析作用從樣品墊到吸水墊部位的順利進(jìn)行，另一方面是為了使樣品溶液與樣品墊有充分反應(yīng)時(shí)間，樣品墊上的緩沖體系可以中和樣品溶液的酸堿度，保證樣品溶液中的有效成分與膠體金結(jié)合墊上的金標(biāo)抗體順利發(fā)生反應(yīng)。

膠體金結(jié)合墊上包被有抗ZEN單抗與膠體金的偶聯(lián)物；硝酸纖維素膜上從樣品墊到吸水墊方向依次包被有ZEN-OVA偶聯(lián)物和羊抗鼠IgG，分別作為檢測(cè)線和質(zhì)控線。

本實(shí)用新型試劑板應(yīng)用層析式抗體免疫競(jìng)爭(zhēng)原理，通過抗原和金標(biāo)抗體反應(yīng)顯色，特異性檢測(cè)飼料中的玉米赤霉烯酮?dú)埩簟Ｈ绻麡悠啡芤汉袣埩簦衩壮嗝瓜┩群湍z體金顆粒上的抗體反應(yīng)，因此當(dāng)膠體金顆粒隨樣品溶液擴(kuò)散至檢測(cè)線時(shí)，膠體金顆粒上抗體的活性位點(diǎn)因被樣品溶液中的玉米赤霉烯酮占據(jù)而無法與檢測(cè)線上玉米赤霉烯酮特異性抗原結(jié)合；當(dāng)樣品中的玉米赤霉烯酮含量超過試劑板檢出限時(shí)，試劑板上的檢測(cè)線顯色較質(zhì)控線淺甚至無顯色，則判定為陽性。相反，如果樣品中玉米赤霉烯酮含量在試劑板檢出限以下或無殘留時(shí)，試劑板上的檢測(cè)線顯色與質(zhì)控線相近或偏深，則判定為陰性。

本實(shí)用新型試劑板的各部分組成成分與功能如下：

塑料模板，起固定試紙條及標(biāo)示功能區(qū)(加樣孔、檢測(cè)區(qū)、質(zhì)控區(qū))的作用。

背襯為一面涂有不干膠的不吸水的韌性材料，如PVC板，起固定支持試紙其他組成部分的作用。

樣品墊由玻璃纖維制成，起吸收樣品溶液與緩沖樣品溶液pH值的作用。