[實用新型]阪崎腸桿菌免疫捕捉PCR檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201220684152.4
• 申請日: 2012-12-11
• 公開（公告）號: CN204474673U
• 公開（公告）日: 2015-07-15
• 發明（設計）人: 劉箐;陳艷
• 申請（專利權）人: 上?；墼派锟萍加邢薰?/a>
• 主分類號: C12M1/34
• 分類號: C12M1/34;C12Q1/68;C12Q1/10;C12R1/01
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及微生物檢測領域，尤其是食源性致病菌檢測領域，公開了一種阪崎腸桿菌的免疫PCR基因檢測試劑盒檢測方法。適用于各種食品中阪崎腸桿菌(Enterobacter?sakazakii)的快速檢測。

背景技術

隨著社會的發展，日益提高的生活水平，人們越發重視食品的質量安全問題。食源性致病菌是引起食品安全事件的主要因素。食源性致病菌的檢測技術是食源性疾病預防與控制的關鍵環節。食源性致病菌快速檢測一直是研究關注的焦點。

阪崎腸桿菌(Enterobacter?sakazakii)，最初被命名為黃色陰溝桿菌，阪崎腸桿菌是在人和動物腸道內寄生的一種革蘭氏陰性無芽孢的棒狀桿菌，屬腸桿菌科。該菌引起的食源性疾病可導致嬰兒(尤其是新生兒)的腦膜炎、小腸結腸炎和菌血癥，報告病例的死亡率達20％～50％，幸存者常遺留嚴重的神經系統疾病。據報道被該菌感染的嬰幼兒得腦膜炎的概率從40％已經上升到了80％，而且94％的患者會引發永久性神經性后遺癥。2004年2月FAO/WHO在日內瓦召開的嬰兒配方粉中阪崎腸桿菌專家研討會上提出，嬰兒配方粉中微量的阪崎腸桿菌污染(＜3CFU/100g)也能導致感染的發生。

近年來，發展出多種快速的方法用來檢測E.sakazakii，例如：聚合酶鏈式反應(PCR)；紅外光譜法；熒光原位雜交^]和DNA微列陣。傳統的E.sakazakii鑒定和計數方法通常需要很多步富集步驟和生化鑒定，需要6到7天才能完成。因此，發展出快速和精準的致病菌檢測方法是至關重要的。

免疫PCR(immuno?polymerase?chain?reaction，IM-PCR)是一種檢測微量抗原的高靈敏度技術。該技術把抗原抗體反應的高特異性和聚合酶鏈反應的高敏感性有機結合起來，其本質是一種以PCR擴增一段DNA報告分子代替酶反應來放大抗原抗體結合率的一種改良型ELISA。免疫PCR是迄今最敏感的一種抗原檢測方法，理論上可以檢測單個抗原分子，但實踐中它的敏感性受許多因素的影響，如連接分子、顯示系統的選擇、DNA報告分子的濃度、PCR循環次數等。目前，國內外報道的免疫PCR的敏感性一般比現行的ELI?SA法高10²～10⁸倍。

為了食品安全，為了尋求更簡便、快速、靈敏的食源性致病菌阪崎腸桿菌的檢測方法，本實用新型是一種阪崎腸桿菌免疫捕獲PCR檢測試劑盒，以此來快速檢測阪崎腸桿菌。

實用新型內容

針對現有技術的不足，本實用新型的目的在于建立一種快速，準確的可進行快捷檢測食源性致病菌阪崎腸桿菌的檢測試劑盒。將致病菌免疫富集方法和基因水平檢測方法有效結合。先用特異性抗體將樣品中的病原菌特異性免疫富集，然后PCR擴增，不僅很大程度提高了檢測靈敏度，而且免疫結合然后PCR擴增，提高了檢測的特異性，大大提高了病原菌檢測的效率

本發明采取的技術方案為：一種阪崎腸桿菌免疫捕獲PCR檢測試劑盒，其主要特點是包括盒體(1)；塑料底板(2)，塑料底板上有數個容器孔，容器孔內分別放置的是10×PCR?Buffer(3)，dNTP(4)，TaqDNA聚合酶(5)，ddH₂O雙蒸水(6)，正向引物(7)，反向引物(8)，陽性對照溶液(9)，陰性對照溶液(10)；自封袋(11)，自封袋內裝有的是包被了阪崎腸桿菌單克隆抗體的檢測免疫PCR管；自封袋放置于塑料底板上，塑料底板放置于盒體內。

進一步，所述的分子生物學試劑中，10×PCR?Buffer裝量為300μL；dNTP裝量為250μL；TaqDNA聚合酶裝量為60μL；正向引物裝量為120μL；反向引物裝量為120μL。

進一步，所述的陽性對照溶液為滅活的阪崎腸桿菌菌液，陰性對照溶液為滅菌的緩沖蛋白胨水。

本實用新型的有益效果：阪崎腸桿菌免疫捕獲PCR檢測試劑盒，是一種食源性致病菌檢測試劑盒，屬于食源性致病菌檢測領域，適用于各種食品中阪崎腸桿菌的快速檢測。該試劑盒集病原菌濃縮，特異性抗體識別，PCR擴增為一體，具有檢測結果準確性高、高靈敏度、檢測快速、使用方便等優點。適用于菌株快速鑒定、食品中毒源檢測等領域，尤其適用于樣品中微量病原的快速檢測。適用于質監部門，進出口檢疫部門等對食樣進行阪崎腸桿菌的鑒定。