[實(shí)用新型]一種用于生物樣本體外純化處理的套管及離心容器

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201220665740.3
• 申請日: 2012-12-05
• 公開（公告）號: CN202925017U
• 公開（公告）日: 2013-05-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙侃;王春有;王冬明;劉湘連;甘朝
• 申請（專利權(quán)）人: 北京東方華輝生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C12M1/24
• 分類號: C12M1/24
• 代理公司: 北京三友知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11127
• 代理人: 姚亮

技術(shù)領(lǐng)域

本實(shí)用新型涉及一種用于生物樣本體外純化處理的套管及離心容器，屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

利用離心法體外富集生物樣本中的生物顆粒是生物學(xué)研究中應(yīng)用最為廣泛的一項(xiàng)技術(shù)。許多生物顆粒均可以通過離心法這一技術(shù)實(shí)現(xiàn)富集，例如，動物或植物的細(xì)胞、亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)、細(xì)菌、病毒或生物大分子等。這些在懸液中的生物顆粒在離心作用下的表現(xiàn)主要取決于生物顆粒的大小和密度，這可以通過斯托克斯方程(Stokes?equation)得到解釋。斯托克斯方程(見下式)描述了球形顆粒在液體介質(zhì)中受到離心作用時(shí)運(yùn)動速率的變化規(guī)律：

v=d2(p2-p1)×g18n]]>

其中：d代表球形顆粒的直徑，p₂代表球形顆粒的密度，p₁代表液體介質(zhì)的密度，n代表液體介質(zhì)的粘度，g代表離心力。通過斯托克斯方程可知，當(dāng)顆粒和液體介質(zhì)的密度相等時(shí)，顆粒在離心場中的沉降速率為零，這是利用離心法富集特定生物顆粒的理論基礎(chǔ)。例如，利用離心法體外富集人血液樣本中的淋巴細(xì)胞時(shí)，由于人淋巴細(xì)胞的密度約為1.077g/cm³，可以利用密度同為1.077g/cm³的密度介質(zhì)實(shí)現(xiàn)從人血液樣本中富集淋巴細(xì)胞的這一過程；又如，DNA的密度在1.500-1.800g/cm³之間，則應(yīng)選用可以配制成該密度范圍溶液的氯化銫或硫酸銫等原料作為密度介質(zhì)配方。

利用離心原理進(jìn)行生物樣本體外純化處理，即從生物樣本中富集生物顆粒的步驟是基本相似的。例如，利用密度介質(zhì)進(jìn)行血液中人淋巴細(xì)胞的體外富集時(shí)，其一般操作步驟包括：(1)用一定比例的平衡鹽溶液或生理鹽水對血液樣本進(jìn)行預(yù)稀釋；(2)將稀釋后的血液樣本小心地沿離心容器壁加入預(yù)裝有密度介質(zhì)的離心容器中，保持樣本與介質(zhì)的界面清晰，不發(fā)生混合，這一過程是保證富集效果的關(guān)鍵步驟，常被稱為“鋪血”；(3)在一定溫度和一定離心條件下進(jìn)行離心，例如20℃時(shí)，離心力為400g的條件下離心30分鐘；(4)小心從離心機(jī)中取出裝有樣本的離心容器，利用巴斯德吸管或移液管等裝置吸取富集在樣本和介質(zhì)層交界面處的“白膜層”；(5)用一定比例的平衡鹽溶液、生理鹽水或細(xì)胞培養(yǎng)基洗滌得到的細(xì)胞產(chǎn)品，除去血小板、細(xì)胞碎片與部分死細(xì)胞，以及殘余的密度介質(zhì)；(6)將得到的細(xì)胞懸液用于細(xì)胞培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

為實(shí)現(xiàn)良好的富集效果，上述操作步驟對于操作者的技術(shù)要求是十分高的。例如，在上述步驟(2)的操作中，操作者必須將稀釋后的血液樣本非常小心地緩緩鋪在密度介質(zhì)之上，保持樣本與介質(zhì)的界面清晰，不發(fā)生混合。這是因?yàn)?，如果血液樣本與密度介質(zhì)發(fā)生混合，最終富集在樣本和介質(zhì)層之間的“白膜層”將變得非常松散，且含有大量紅細(xì)胞污染，這不僅會給步驟(4)中的收集操作帶來視覺判斷上的障礙，還會對目的細(xì)胞的收率和純度產(chǎn)生嚴(yán)重的不良影響。因此，“鋪血”這一操作的特點(diǎn)是既費(fèi)時(shí)、又費(fèi)力，對于操作者的技術(shù)要求高，不利于實(shí)現(xiàn)規(guī)?；幚恚貏e是用于臨床治療用途時(shí)，大量血液樣本的規(guī)模化處理是一大技術(shù)難題。又例如，在上述步驟(4)的操作中，操作者首先需要對“白膜層”的位置進(jìn)行準(zhǔn)確判斷，然后利用巴斯德吸管或移液管等裝置伸入液面以下吸取富集在這一區(qū)域的目的細(xì)胞，這不僅費(fèi)時(shí)費(fèi)力，且隨著目的細(xì)胞不斷地被吸出，白膜層的厚度逐漸縮小，外觀和位置也越來越不明顯，這對于操作者何時(shí)應(yīng)停止吸取操作的判斷再次提出了較高的要求，如果操作者對細(xì)胞的余量出現(xiàn)判斷上的失誤，提前停止了吸取操作，則目的細(xì)胞的收率將明顯降低。