[實用新型]黃斑變性相關基因位點檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201220492212.2
• 申請日: 2012-09-25
• 公開（公告）號: CN203307338U
• 公開（公告）日: 2013-11-27
• 發明（設計）人: 任峻;張華忠
• 申請（專利權）人: 浙江愛易生物醫學科技有限公司
• 主分類號: C12M1/34
• 分類號: C12M1/34;C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本實用新型涉及分子生物學和醫學領域，具體涉及檢測人體黃斑變性相關基因位點是否發生突變的試劑盒，通過同時檢測與黃斑變性關聯的基因CFH、ARMS2、C3、SKIV2L和TIMP3的單核苷酸多態性位點基因型來評估個體發生黃斑變性風險性。

背景技術

黃斑變性是與年齡相關的視網膜脈絡膜中心區域（黃斑區）的光感受器—視網膜色素上皮（retinal?pigment?epithelium，RPE）-Bruch膜—脈絡膜毛細血管復合體的進展性病變，可導致中心視力的喪失。

黃斑變性通常發生于50歲以上人群，部分患者侵及雙眼，是美國和其他發達國家老年人群中的首位致盲原因，在全世界范圍內大約有5千萬患者，其發生率隨著人口的老化迅速上升。在美國，75歲以上人群中大約有6~8%患有能導致嚴重視力損害的晚期黃斑病變。在中國，北京地區調查結果顯示75歲以上人群黃斑變性患病率早期和晚期分別為2.99%和0.90%。國人黃斑變性患病率雖然遠低于歐美國家，但由于中國人口結構的老齡化趨勢，其造成的危害依然不能忽視。

目前，研究者們從分子遺傳學研究黃斑變性，已定位出五個與黃斑變性密切相關的基因，它們分別是CFH基因、ARMS2基因、C3基因、SKIV2L基因和TIMP3基因。

補體是由存在于人或脊椎動物血清與組織液中的一組可溶性蛋白以及存在于白細胞與其他細胞表面的一組膜結合蛋白和補體受體所組成的。在機體免疫系統中擔負抗感染和免疫調節作用，并參與免疫病理反應。補體主要通過經典途徑、旁路途徑以及凝集素途徑等三種方式被激活后發揮免疫防御功能，三條激活途徑均可產生C3轉化酶，促使C3活化為C3a和C3b，進而導致膜攻擊復合體C5?b-9生成，使細胞溶解從而發揮免疫學作用。

CFH是補體旁路激活途徑的調節因子，定位于染色體1q32。它由20個短共有重復區域（short?consensus?repeats，SCRs）組成，每個SCR由大約60個氨基酸組成，形成球狀結構。CFH能夠選擇性阻斷C3活化為C3b，并可以降解C3b，從而調控補體通路的激活過程。經研究指出CFH對炎癥反應的控制作用對某些老年人的眼睛來說是必不可少的。

位于染色體10q26的ARMS2是第二個被發現與黃斑變性發病機理相關的位點，在視網膜和胎盤均有表達。ARMS2是假定的人類基因，編碼一個假定的蛋白，含107個氨基酸，除了9個已知的磷酸化位點以外，其功能未知。改變靈長類特有ARMS2的編碼序列，等位基因T的突變使69號氨基酸由丙氨酸變為絲氨酸，在哺乳動物細胞表達時產生一種線粒體蛋白。相關的線粒體功能紊亂可導致能量代謝和動態平衡的破壞，產生反應性氧化物，線粒體DNA的體細胞突變產物堆積，凋亡通路被激活。黃斑變性患者視網膜的線粒體數目和體積減少，線粒體ARMS2蛋白出現A69S替代，導致功能改變使黃斑區光感受器的年齡相關性變性的易感姓增加。Kanda等通過翻譯了人類視網膜的ARMS2cDNA克隆，表明ARMS2編碼真實的蛋白。

SKIV2L基因編碼的DEAD?box蛋白被認為在參與胚胎，精子，細胞生長和分裂的過程中起到重要作用。

TIMPs家族是一個多基因家族的編碼蛋白，是MMPs活性的特異性抑制因子。現已發現4種，分別命名為：TIMP-1、TIMP-2、TIMP-3、TIMP-4。TIMP-3的分子量為28kD，可以促進非轉化細胞的增殖及轉化表現的表達。TIMP-3可抑制MMP-1、MMP-2、MMP-9和MMP-13的活性。

在TIMPs家族中，TIMP-3與其他成員不同，可以與ECM緊密結合，這種結合需借助于TIMP-3的C末端功能區。TIMP-3的C末端如果在156位、166位、167位、168位氨基酸發生點突變，或是在第4內含子與第5外顯子之間插入異常堿基，可以造成Sorsby黃斑變性，一種常染色體遺傳性視覺障礙疾病，此病的一個重要特征是脈絡膜新血管生成的作用。

發明內容

本實用新型針對目的是提供一種采用熒光定量PCR技術同時檢測五個與黃斑變性關聯的基因SNP位點的試劑盒。該試劑盒由包裝盒體、襯墊、裝有檢測五個SNP位點的熒光定量PCR反應液的五個試管、裝有陽性對照品的一個試管、裝有陰性對照品的一個試管組成，襯墊上設有容器孔，分別放置五管熒光定量PCR反應液、陽性對照品和陰性對照品。

其中熒光定量PCR反應液的成分包含：PCR緩沖液、MgCl₂、dNTPs、SNP位點檢測用上游引物、SNP位點檢測用下游引物、SNP位點基因型一熒光探針、SNP位點基因型二熒光探針、Taq?DNA聚合酶。