[實用新型]酶聯免疫層析試劑盒

有效

• 申請號: 201220299634.8
• 申請日: 2012-06-20
• 公開（公告）號: CN202794177U
• 公開（公告）日: 2013-03-13
• 發明（設計）人: 王金愛
• 申請（專利權）人: 北京康美天鴻生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 馮瓊;姜義民

技術領域

本實用新型涉及生物檢測技術領域，特別涉及一種酶聯免疫層析試劑盒。

背景技術

免疫學檢測技術在醫學和生物學領域被廣泛應用。其中目前應用最為廣泛的免疫學檢測技術是免疫標記技術，即用膠體金、熒光素、酶或放射性核素等標記抗體或抗原，進行抗原-抗體反應。標記物與抗體或抗原連接后并不改變后者的免疫特性，具有靈敏度高、快速、可定性、定量、定位等優點。

傳統上多用熒光免疫法、化學發光法、酶聯免疫吸附法（ELISA）及膠體金免疫層析法等。但熒光免疫法和化學發光法對技術要求高，而且必須配以昂貴的專有設備使用，因此只適用于一些大型醫院及檢疫部門等，不易進行常規開展；酶聯免疫吸附法操作復雜，使用過程反應時間較長，需要對樣品進行酶消化、震蕩等處理，使用不是很方便；膠體金免疫層析法雖然具有標本用量少，簡便快速，便宜的優勢，然而當遇到某些樣本中抗原或抗體含量極低時，膠體金的顏色將很淺，很難用肉眼來判斷結果，容易出現誤判，靈敏度較低。

發明內容

針對上述現有技術存在的缺陷，本實用新型要解決的技術問題為提供一種酶聯免疫層析試劑盒，與現有方法相比，本實用新型試劑盒檢測靈敏度高、分辨率好、特異性強。

具體地，本實用新型提供了一種酶聯免疫層析試劑盒，包括盒體和盒內的酶聯免疫層析試紙條、試劑瓶和放試劑瓶的下凹瓶位；所述試紙條包括樣品墊（1）、結合墊（2）、層析膜（3）、吸水墊（4）和背襯墊（7），其中樣品墊（1）、結合墊（2）、層析膜（3）和吸水墊（4）搭載于背襯墊（7）之上，樣品墊（1）連接于結合墊（2），結合墊（2）連接于層析膜（3），層析膜（3）上設置有質控帶（5）和檢測帶（6），層析膜（3）連接于吸水墊（4）；

所述試劑瓶中分別裝有系列濃度的待測物標準品、樣品稀釋液、底物顯色液、洗滌液。

上述試劑盒中，所述結合墊上固定有酶標記或生物素標記的特異性抗體，所述特異性抗體為可特異性結合待測物的抗體；所述質控帶上包被有抗所述酶標記或生物素標記的特異性抗體的二抗；所述檢測帶上固定有可與待測物競爭性結合特異性抗體的抗原。

所述酶為辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶、葡萄糖氧化酶或β-半乳糖苷酶。

所述可與待測物競爭性結合特異性抗體的抗原為待測物分子半抗原-BSA偶聯物。

上述試劑盒中，所述層析膜（3）為硝酸纖維素膜或硝酸纖維素膜與醋酸纖維素膜組成的混合膜。

所述樣品稀釋液為磷酸鹽緩沖液或硼酸鹽緩沖液。

所述底物顯色液由A液和B液組成，所述A液為H₂O₂溶液，所述B液包含沉淀型的供氫體，所述供氫體為OPD、TMB、DAB、聯苯胺、5-氨基水楊酸或4-氯-1-萘酚，所述A液與B液分別裝于兩個試劑瓶中。

本實用新型試劑盒的定性檢測原理：

檢測帶包被待檢物-BSA偶聯物，質控帶包被抗酶標或生物素標記的抗體的二抗。結合墊上結合生物素標記的單抗。檢測過程中，取一定量樣品溶液加入樣品墊，樣本和被溶解的酶標抗體一起在過濾片上移動。如果樣品溶液含有相應待檢物，則待檢物將和抗體先行反應，因此當擴散至檢測帶時，抗體的活性位點將因被樣品溶液中的待檢物占據而無法與檢測帶上的待檢物抗原結合；之后加入HRP標記的親和素，與通過單抗而固定在膜上的生物素結合；加入洗滌液，洗掉沒有結合的過氧化物酶，最后加入底物使用液，當樣品中的待檢物含量超過試劑板檢出限時，試劑板上的檢測帶將較質控帶顯色淡或甚至無顯色，判定為陽性。反之，當樣品中待檢物含量在試劑板檢出限以下或無殘留時，試劑板上的檢測帶顯色與質控帶相近或偏深，判定為陰性。

當將本實用新型試劑盒與配套的定量分析儀結合使用時，可以得出待檢物的具體含量，實現定量檢測的目的。

本實用新型試劑盒的主要優點如下：

1）與現有方法相比檢測靈敏度高、分辨率好、特異性強；

2）操作簡便，無需專用儀器設備，結果直觀，安全廉價，適合現場快速檢測。

3）與讀數儀結合時，可以準確測定待測物的含量。

附圖說明

圖1為酶聯免疫層析試紙條組裝示意圖，其中1為樣品墊，2為結合墊，3為層析膜，4為吸水墊，5為質控帶，6為檢測帶，7為背襯墊。

具體實施方式

為了使本領域的技術人員更好地理解本實用新型的技術方案，下面結合具體實施例對本實用新型作進一步的詳細說明。

實施例1本實用新型有機磷免疫層析試劑盒的制備