[實用新型]EMA與PCR結合檢測飼料中沙門氏菌活細胞試劑盒

有效

• 申請號: 201220228101.0
• 申請日: 2012-05-21
• 公開（公告）號: CN202610240U
• 公開（公告）日: 2012-12-19
• 發明（設計）人: 班付國;高延玲;周紅霞;劉宏偉;張發旺;梁軍;侯文宏;趙全成;曲登峰;王世山;趙瑜;張影;雷東風;彭峰;徐品;宋志超;姚德新;常守海;陳陽;董鵬;李金磊;狄元冉;張磊
• 申請（專利權）人: 河南省獸藥監察所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/10
• 代理公司: 鄭州紅元帥專利代理事務所(普通合伙) 41117
• 代理人: 王瑞麗

技術領域

　　本實用新型涉及一種用于檢測飼料中沙門氏菌活細胞試劑盒，具體涉及一種EMA與PCR結合檢測飼料中沙門氏菌活細胞試劑盒。

背景技術

畜禽飼用含有沙門氏菌的飼料，如果菌量達到一定數目，就可引起疾病或帶菌，因此準確、快速地檢測飼料中的沙門氏菌，對于防止畜禽和人類沙門氏菌污染具有十分重要的意義。傳統的PCR檢測方法可以對沙門氏菌等特定微生物DNA的單條基因片段進行放大，放大后，特定的DNA片段被成千上萬倍的復制，運用可視技術按照細菌基因序列探測和識別復制后細菌的遺傳物質可以更加容易。然而，目前的PCR檢測方法容易出現假陽性的結果，這造成了巨大的浪費和不必要的召回事件的發生。出現這種結果的原因是，PCR技術跟其它的DNA法一樣，均不能將活的跟死的沙門氏菌區分開，因此這導致PCR技術提供了錯誤的結果。

實用新型內容

由鑒于此，本實用新型的目的是提供一種EMA與PCR結合檢測飼料中沙門氏菌活細胞試劑盒，克服了現有技術的不足，可用于快速檢測檢測飼料樣品中沙門氏菌活細胞，制作簡單，使用方便。

為了實現上述目的，本實用新型采用以下技術方案：

一種EMA與PCR結合檢測飼料中沙門氏菌活細胞試劑盒，包括箱體，其中，所述箱體底部的內壁上均勻設置有六個與離心管相配合的凹槽，所述凹槽內設有分別放入沙門氏菌陽性對照、沙門氏菌陰性對照、Taq預混酶、Taq預混酶引物混合物、DL?Marker?2000、EMA溶液的六個離心管。

本實用新型的有益效果為：

利用本實用新型可采用EMA與PCR結合技術用疊氮溴化乙錠染料對飼料樣品的菌懸液進行處理，疊氮溴化乙錠在強光照的環境下進入死的細菌體內后與DNA分子進行結合，使得細菌在染色后不能被溶解，但不能穿透活細胞，這種改進的PCR技術很容易區分飼料樣品中死的沙門氏菌及活的沙門氏菌，從而為飼料中沙門氏菌的快速、準確檢測提供有效手段。本實用新型在EMA與PCR結合檢測飼料中沙門氏菌活細胞檢測中使用，制作簡單，攜帶方便，節省了檢測時臨時準備檢測用品的時間，提高了工作效率。

本實用新型的其他優點、目標和特征在某種程度上將在隨后的說明書中進行闡述，并且在某種程度上，基于對下文的考察研究對本領域技術人員而言將是顯而易見的，或者可以從本實用新型的實踐中得到教導。本實用新型的目標和其他優點可以通過下面的說明書或者附圖中所特別指出的結構來實現和獲得。

附圖說明

圖1為本實用新型的結構示意圖；

圖2為本實用新型的底部凹槽的示意圖。

具體實施方式

如圖1、圖2所示，本實用新型的箱體1底部均勻設置有六個凹槽，分別為沙門氏菌陽性對照離心管凹槽21、沙門氏菌陰性對照離心管凹槽31、Taq預混酶離心管凹槽41、Taq預混酶引物混合物離心管凹槽51、DL?Marker?2000離心管凹槽61、EMA溶液離心管凹槽71，在沙門氏菌陽性對照離心管凹槽21、沙門氏菌陰性對照離心管凹槽31、Taq預混酶離心管凹槽41、Taq預混酶引物混合物離心管凹槽51、DL?Marker?2000離心管凹槽61、EMA溶液離心管凹槽71內分別放入相應的沙門氏菌陽性對照離心管2、沙門氏菌陰性對照離心管3、Taq預混酶離心管4、Taq預混酶引物混合物離心管5、DL?Marker?2000離心管6、EMA溶液離心管7。

Taq預混酶及引物混合物，其預混酶為20?u/mL?，引物濃度為100pmol/mL?，其保存條件為-20°C。引物其序列為：GTGAAATTATCGCCACGTTCGGG?，SE-2:??CATCGCACCGTCAAAGGAAC。?EMA溶液，其濃度為0.5mg/mL。

本實用新型用于EMA與PCR結合檢測飼料中沙門氏菌活細胞試驗，采用EMA與PCR結合技術用疊氮溴化乙錠染料對飼料樣品的菌懸液進行處理，疊氮溴化乙錠在強光照的環境下進入死的細菌體內后與DNA分子進行結合，使得細菌在染色后不能被溶解，但不能穿透活細胞，這種改進的PCR技術很容易區分飼料樣品中死的沙門氏菌及活的沙門氏菌，從而為飼料中沙門氏菌的快速、準確檢測提供有效手段。

最后說明的是，以上實施例僅用以說明本實用新型的技術方案而非限制，本領域普通技術人員對本實用新型的技術方案所做的其他修改或者等同替換，只要不脫離本實用新型技術方案的精神和范圍，均應涵蓋在本實用新型的權利要求范圍中。