[實用新型]一種核糖核苷酸還原酶1基因表達檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201220162877.7
• 申請日: 2012-04-17
• 公開（公告）號: CN202519260U
• 公開（公告）日: 2012-11-07
• 發明（設計）人: 曹海霞;王卓;井昶雯;馬蓉;吳建中
• 申請（專利權）人: 曹海霞;王卓;井昶雯;馬蓉;吳建中
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京正理專利代理有限公司 11257
• 代理人: 張文祎

技術領域

本實用新型涉及一種檢測試劑盒，尤其是涉及一種核糖核苷酸還原酶1基因表達檢測試劑盒。

背景技術

近年來，隨著分子生物學的發展，國內外對細胞癌變的研究已進入到分子水平，人們發現DNA修復和復制的缺陷是細胞發生癌變的重要機制。核糖核苷酸還原酶(RR)在癌組織表達異常增高，同時其催化產物脫氧核糖核苷酸(dNTP)是DNA損傷修復及復制過程中必不可少的原料，因此RR的功能完善與否對腫瘤的發生、發展和防治均有重要影響。

RRM1是RR的一個亞單位，它是DNA合成通路中的限速酶，它能逆轉二磷酸核苷酸成為二磷酸脫氧核苷酸屬于腫瘤抑制基因，定位于染色體11p15.5區域，含19個外顯子。該區域是一個可出現于多種惡性腫瘤的雜合子丟失(loss?of?heterozygosity，LOH)區域，稱為LOH11A。人們很早就發現在胃癌、食管癌和乳腺癌等存在11p15.5的雜合性丟失，因此認為該區域的丟失與惡性腫瘤的轉移有關系。另外，也有研究表明，這種雜合性缺失與預后有一定的相關性，具有LOH丟失的非小細胞肺癌(non-small?cell?lung?cancer，NSCLC)患者預后較差，生存期較沒有LOH的患者短；但是，也有臨床研究的結果顯示，高水平表達RRM1的患者其預后較差；這樣的結果與之前的RRM1作為抑癌基因高表達時抑制腫瘤侵襲的結論有所不同。通過對比出現不同結果的臨床研究所選擇的病例發現，早期的NSCLC患者單獨接受手術治療時，高表達RRM1則預后較好，而晚期僅接受含吉西他濱方案化療的患者RRM1高表達卻預后較差，說明RRM1的預測意義因患者的分期和治療方案的不同有所改變。

眾多研究證實DNA修復基因的修復能力與癌癥的發病和耐藥有關。一般認為，DNA修復基因修復力低者癌癥發生的風險較正常人明顯增加，而修復力高者則易對化療藥物耐藥使化療失敗。RRM1是細胞內在DNA損傷修復能力的代表，因而也是顯示病變組織內累積性DNA損傷程度的生物標志。RRM1高表達可相對消弱藥物對RRM1的抑制作用，進而導致腫瘤細胞對藥物的敏感性降低。

RRM1在所有的腫瘤細胞中都存在表達，而且表達水平差異很大。臨床研究已證實RRM1與吉西他濱耐藥相關。因此，檢測RRM1的表達對于腫瘤患者的治療和預后有著重要意義。

實用新型內容

為了解決上述技術問題，本實用新型提供一種核糖核苷酸還原酶1基因表達檢測試劑盒，包括盒體1、盒蓋2、固定座3、在固定座3上設有容器孔，其容器孔中分別放置去離子水試劑瓶4、擴增引物管5、白蛋白內參引物管6、SYBRpremix?Ex?Taq(含ROX)管7。

上述各種液體分別裝在容器內，插入容器孔內。

所訴容器孔的大小根據去離子水試劑瓶4、擴增引物管5、白蛋白內參引物管6、SYBR?premix?Ex?Taq管7的大小而變化。

所述擴增引物為特異性擴增ERCC1的引物，上游引物序列為5′-CAAGGTCGTGTCCGCAAAG-3′；下游引物序列為5′-GGTGCCTGTTTCCGTCTGA-3′；所述白蛋白內參引物上游引物序列為5′-TTCTACAATGAGCTGCGTGTG-3′，下游引物序列為：5′-CAGCCTGGATAGCAACGTACA-3′。引物包括擴增引物和白蛋白內參引物，引物濃度為10umol/L。

所述SYBR?premix?Ex?Taq(含ROX)(2*Conc.)含有0.4mmol/L的dNTPs，4mmol/L的Mg²⁺，2xBuffer，1U/20μl的Ex?Taq?HS，1U/20μl?Tli?RnaseH，1mmol/L?SYBR?Green?1，0.1mmol/L?ROX?Reference?Dye。

本實用新型與現有產品相比，具有如下積極有益的效果：

本試劑盒結構簡單、設計合理、使用方便、制造容易、檢測過程不易受污染；本試劑盒在檢測一種核糖核苷酸還原酶1基因表達時具有敏感性高、特異性強、耗時短等優點。

附圖說明

圖1為本實用新型的整體結構示意圖。

具體實施方式

下面結合附圖和實施例對本實用新型進行進一步說明。

表1為本實用新型PCR反應體系。