[實用新型]一種檢測豬尿中萊克多巴胺的免疫膠體金試劑板

有效

• 申請號: 201220151631.X
• 申請日: 2012-04-06
• 公開（公告）號: CN202599959U
• 公開（公告）日: 2012-12-12
• 發明（設計）人: 張少恩;桑麗雅
• 申請（專利權）人: 杭州南開日新生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/558
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本實用新型涉及一種檢測萊克多巴胺的試劑板，具體涉及一種檢測豬尿中萊克多巴胺殘留的免疫膠體金試劑板。

背景技術

萊克多巴胺屬于苯乙胺類(PEAs)藥物，是β-腎上腺受體的激動劑。對動物使用，可以影響動物體內的營養分配，有效減少脂肪增長，提高瘦肉率。但如果作為飼料添加劑，使用劑量是藥劑量的10倍以上，由于用量大、使用的時間長、代謝慢，所以在動物體內的殘留量都很大。而且萊克多巴胺可通過食物鏈進入人體，當人體累計攝入超過一定值或食用了高殘留的內臟組織，易出現毒副作用如肌肉震顫、四肢麻痹、心動過速、肌肉疼痛、惡心等。

歐盟早已明確禁止在食用性動物中使用包括萊克多巴胺在內的所有β-腎上腺素興奮劑類藥物，我國農業部2002年3月農牧發[2002]1號文“關于發布《食用動物禁用的獸藥及其化合物清單》的通知”中明確規定禁止使用萊克多巴胺。我國農業部、衛生部、國家藥品監督管理局2002年第176號公告《禁止在飼料和動物飲用水中使用的藥物品種目錄》中將其列入禁用清單。

隨著人們對食品安全問題的日益重視，食品的快速檢測技術研究已經成為中國生物技術研究領域的一大熱點。為了保證畜禽產品質量安全，保障人體健康，建立一種快速、穩定地檢測動物性食品中萊克多巴胺殘留的方法勢在必行。

目前，萊克多巴胺殘留的檢測方法主要有理化分析法和免疫分析法。理化分析法，如高效液相色譜法(HPLC)和液相色譜質譜聯用法(LC-MS)，這些方法具有特異性好、準確率高的特點，是各大檢測機構對檢測樣本進行確證的首選方法，但對設備、環境、操作技能等要求較高，不利于大規模樣本篩選，因而不適合廣大基層部門。免疫分析法常用的有酶聯免疫吸附法(ELISA)和免疫層析法(GICA)。ELISA法具有檢測量大，操作相對簡單等優點，越來越多地被用于動物性食品中萊克多巴胺殘留的檢測，但是ELISA法整個操作時間仍需要1-2h，且需用到特殊的儀器設備，具有一定局限性。

膠體金免疫層析法是二十世紀九十年代興起的一項新型的快速免疫學檢測技術。該方法將反應所需要原料的全部或大部分整合到試劑中，可在5-10min內完成對樣品中β-興奮劑類藥物的定性和半定量測定，具有簡單、快速、靈敏度高等特點，無須儀器設備配合測定，檢測既可在實驗室中進行，也可在養殖場等進行實地測定。

實用新型內容

本實用新型針對檢測需求，研制開發一種檢測豬尿中萊克多巴胺殘留的免疫膠體金快速檢測試劑板。本實用新型試劑板操作簡便快捷，靈敏度高，特異性好，實驗結果肉眼可直觀判斷，無需配備儀器設備，5-10min即可完成對樣品中萊克多巴胺藥物殘留的測定。

本實用新型試劑板應用層析式抗體免疫競爭原理，通過抗原和金標抗體反應顯色，特異性檢測豬尿中的萊克多巴胺藥物殘留水平。如果樣品溶液中含有萊克多巴胺殘留，萊克多巴胺先和膠體金顆粒上的抗體反應，因此當膠體金顆粒隨樣品溶液擴散至檢測線時，膠體金顆粒上抗體的活性位點因被樣品溶液中的萊克多巴胺藥物占據而無法與檢測線上萊克多巴胺特異性抗原結合；當樣品中的萊克多巴胺含量超過試劑板檢出限時，試劑板上的檢測線無顯色，判定為陽性。反之，當樣品中萊克多巴胺含量在試劑板檢出限以下或無殘留時，試劑板上的檢測線顯色，判定為陰性。

本實用新型試劑板由上下兩塊塑料模板和背襯組成，背襯上依次緊密粘貼著樣品墊、膠體金結合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊。相鄰各部分間有1-2mm的重疊以保證層析作用從樣品墊到吸水墊部位的順利進行。

膠體金結合墊上包被有抗萊克多巴胺單克隆抗體與膠體金的結合物；硝酸纖維素膜上從樣品墊到吸水墊方向依次包被有萊克多巴胺-載體蛋白偶聯物和羊抗鼠IgG，分別作為檢測線和控制線。偶聯萊克多巴胺的載體蛋白可為牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)、血藍蛋白(KLH)等。

本實用新型試劑板的各部分組成成分和功能如下：

塑料模板，起固定背襯和標示各功能區(加樣孔、檢測區、控制區)的作用。

背襯，由一面涂有不干膠的聚氯乙烯(PVC)材料制成，起固定支撐試劑板其他組成部分的作用。

樣品墊，由玻璃纖維制成，起吸收樣品溶液和緩沖樣品溶液pH值的作用。

膠體金結合墊，由聚酯膜制成，其上有抗萊克多巴胺單克隆抗體與膠體金顆粒的結合物，為樣品溶液中有效成分和金標抗體反應提供場所。

硝酸纖維素膜，從樣品墊到吸水墊方向上依次噴有檢測線和控制線，將反應結果以肉眼可見的顏色表征出來。

吸水墊，由濾紙制成，吸收反應過程中多余的溶液。