[實(shí)用新型]磺胺類藥物ELISA檢測(cè)試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201220077239.5
• 申請(qǐng)日: 2012-03-02
• 公開（公告）號(hào): CN202649209U
• 公開（公告）日: 2013-01-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 何方洋;聶雯瑩;吳鵬;余厚美;何麗霞;胡德專;陳煒玲;扶勝
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京勤邦生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/543
• 分類號(hào): G01N33/543
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本實(shí)用新型涉及一種檢測(cè)磺胺類藥物殘留量的試劑盒，特別是檢測(cè)動(dòng)物組織（肌肉/魚/蝦）、雞蛋、飼料、尿液中磺胺類藥物殘留量的酶聯(lián)免疫檢測(cè)（ELISA）試劑盒，ELISA（Enzyme?Linked?Immunosorbnent?Assay）是酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定的簡(jiǎn)稱，它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種酶免技術(shù)。?

背景技術(shù)

磺胺類藥物（Sulfonamides，SAs）是一類具有對(duì)氨基苯磺酰胺結(jié)構(gòu)、用于預(yù)防和治療細(xì)菌感染性疾病的化學(xué)治療藥物。因具有廣譜、穩(wěn)定、經(jīng)濟(jì)、易用以及聯(lián)合抗菌增效劑效果可提高數(shù)十倍的特點(diǎn)，常以亞治療濃度的藥物做為飼料添加劑來預(yù)防疾病的發(fā)生，提高飼料的轉(zhuǎn)化率和促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，其中常用的SAs就有十幾種。但該類藥物存在嚴(yán)重副作用，人體中長(zhǎng)期存在會(huì)導(dǎo)致許多細(xì)菌對(duì)磺胺類藥物產(chǎn)生耐藥性，且有潛在的致癌性，因此已引起了國(guó)內(nèi)外的高度重視。我國(guó)以及美國(guó)、歐盟等國(guó)家規(guī)定了動(dòng)物性食品中總磺胺以及單個(gè)磺胺的最高殘留限量（MRLs）為0.1mg/kg，其中磺胺二甲基嘧啶（SM2）的MRLs為0.025μg/ml。?

目前，磺胺類藥物殘留的檢測(cè)方法主要有微生物學(xué)法、理化分析方法和免疫法等。微生物學(xué)法簡(jiǎn)便、費(fèi)用低，但操作費(fèi)時(shí)且敏感性、特異性都較差，在定性定量上都存在困難，不能滿足現(xiàn)代殘留檢測(cè)的需要，甚至有些檢測(cè)結(jié)果還達(dá)不到最高殘留限量的要求；理化法常作為確證方法用于測(cè)定動(dòng)物組織中的藥物殘留，如氣相色譜（GC）、高效液相色譜（HPLC）、氣-質(zhì)聯(lián)用（GC-MS）、液-質(zhì)聯(lián)用（HPLC-MS）等，這些方法靈敏、準(zhǔn)確，特異性強(qiáng)、分離度好，可以同時(shí)測(cè)定多種藥物，但需要昂貴的儀器、樣品的前處理復(fù)雜、繁瑣費(fèi)時(shí)、檢測(cè)的成本較高，不能現(xiàn)場(chǎng)操作，而且需專業(yè)人員操作，所以限制了其應(yīng)用；與之相比，酶聯(lián)免疫方法具有特異性好、靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)成本低、適合于批量樣品的篩選檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)，而且所需設(shè)備少，操作簡(jiǎn)單易學(xué)，成本低廉，能夠更好地滿足我國(guó)畜禽養(yǎng)殖戶、屠宰場(chǎng)、食品企業(yè)、政府職能監(jiān)管部門等開展檢測(cè)工作。?

實(shí)用新型內(nèi)容

本實(shí)用新型所要解決的問題是提供一種小巧輕便的磺胺類藥物殘留量檢測(cè)試劑盒，其操作簡(jiǎn)便，檢測(cè)快速、準(zhǔn)確、靈敏度高，成本低，穩(wěn)定性好，需要的技術(shù)含量不高，可進(jìn)行一次連續(xù)多個(gè)樣品中磺胺類藥物殘留量的測(cè)定，減少了檢測(cè)樣本所需要的時(shí)間。本實(shí)用新型可以檢測(cè)15種磺胺類藥物。?

本實(shí)用新型的技術(shù)方案是：一種磺胺類藥物ELISA檢測(cè)試劑盒，包括盒體和盒內(nèi)的一塊96孔的酶標(biāo)板、一張蓋板膜、14瓶試劑和放試劑的下凹瓶位、一個(gè)自封袋、一份說明書和一?份質(zhì)檢報(bào)告，其特征在于：酶標(biāo)板時(shí)采用96孔試劑板作為固相載體，在試劑盒微孔條上預(yù)包被磺胺類藥物偶聯(lián)抗原制成的檢測(cè)板，14瓶試劑分別為7瓶標(biāo)準(zhǔn)品溶液、酶標(biāo)二抗、抗體工作液、顯色液A液、顯色液B液、終止液、濃縮洗滌液、濃縮復(fù)溶液，下凹瓶位共15個(gè)。?

酶標(biāo)板由外框支撐架及放置其上的可拆的12條酶標(biāo)反應(yīng)微孔條組成，每個(gè)可拆裝酶標(biāo)反應(yīng)微孔條有8個(gè)反應(yīng)孔，放入真空鋁箔袋中，盒體為硬紙盒，下凹瓶位由塑料泡沫制成，以塑料硬膜為蓋板膜，蓋板膜大小與酶標(biāo)板橫切面大小一致，將14瓶試劑用不同大小、不同顏色的塑料瓶盛裝并固定在下凹瓶位中，與酶標(biāo)板、蓋板膜、自封袋、說明書、質(zhì)控報(bào)告一同封裝在硬紙盒內(nèi)，以便于攜帶和運(yùn)輸。14瓶試劑分別為7瓶1ml標(biāo)準(zhǔn)品溶液、12ml酶標(biāo)二抗、7ml抗體工作液、7ml顯色液A液、7ml顯色液B液、7ml終止液、40ml濃縮洗滌液、50ml濃縮復(fù)溶液。每一個(gè)試劑盒中的試劑足夠進(jìn)行96次測(cè)定（包括標(biāo)準(zhǔn)分析孔），既可進(jìn)行一次連續(xù)多個(gè)樣品的檢測(cè)，也可以將板孔拆開多次檢測(cè)。將剩下的放回鋁箔袋中用自封袋密封，這樣可以保證試劑盒檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。檢測(cè)時(shí)，樣本中的磺胺類藥物將和酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被的磺胺類藥物偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗磺胺類藥物抗體，加入酶標(biāo)二抗后，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與樣本中磺胺類藥物的殘留量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較再乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即可得出樣品中磺胺甲基異噁唑的殘留量，再利用交叉反應(yīng)率計(jì)算樣本中含有的其他磺胺類藥物的殘留量，其操作簡(jiǎn)便易行。?

經(jīng)實(shí)驗(yàn)表明本試劑盒具有很高的靈敏度：動(dòng)物組織（雞肉/豬肉/魚/蝦）樣本的最低檢測(cè)限為1.0μg/kg；雞蛋樣本的最低檢測(cè)限為4μg/kg；飼料樣本的最低檢測(cè)限為40μg/kg；尿液樣本的最低檢測(cè)限為4μg/kg。動(dòng)物組織（雞肉/豬肉/魚/蝦）樣本的回收率為95%±15%；雞蛋樣本的回收率為80%±10%；飼料樣本的回收率為85%±15%；尿液樣本的回收率為90%±10%。?