[發(fā)明專利]檢測男性不育癥Dmc1基因1個致病突變位點的試劑盒及其PCR擴增方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210595000.1
• 申請日: 2012-12-28
• 公開（公告）號: CN103911424A
• 公開（公告）日: 2014-07-09
• 發(fā)明（設計）人: 朱威;賀雄雷;潘武廣;郭蕾;雷楗勇;潘岷溟
• 申請（專利權）人: 廣州君赫生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種檢測人類男性不育癥致病基因突變的PCR試劑盒。其特征在于：所述試劑盒包括檢測男性不育癥Dmc1基因中1個致病突變位點G817C的一組特異性引物中及PCR反應mix。?

2.根據權利要求1，以男性不育癥Dmc1基因致病位點G817C所在的Dmc1基因的第11外顯子DNA序列為模板設計引物。其特征在于：針對致病位點G817C所設計的引物對中，正常模板配對引物中上游引物的3’端含有序列TGCCGA或下游引物的3’端含有序列GGATCG，突變模板配對引物中上游引物的3’端含有序列TGCCCA或下游引物的3’端含有序列GGATGG。其中3’端的-3與-2位堿基之間的磷酸二酯鍵采用磷硫酰修飾，或將-2位堿基經鎖核酸化(LNA)修飾。?

3.根據權利要求2，優(yōu)選的一組特異性引物的序列分別如下所示。?

正常模板配對引物G817C?N?F：5’-TCAAATGACTGCCGA-3’；突變模板配對引物G817C?M?F：5’-TCAAATGACTGCCCA-3’；共同的下游引物G817C?R：5’-AGGTTCAAGTGATTC-3’。其中，所述正常模板配對引物G817C?N?F和突變模板配對引物G817C?M?F的3’端的-3與-2位堿基之間的磷酸二酯鍵采用磷硫酰修飾，或將-2位堿基經鎖核酸化(LNA)修飾。?

4.根據權利要求3，所述正常模板配對引物及突變模板配對引物的3’端的-3與-2位堿基之間的磷酸二酯鍵采用磷硫酰修飾，或將-2位堿基經鎖核酸化(LNA)修飾。?

5.一種采用權利要求1和2檢測人類男性不育癥Dmc1基因中1個致病突變位點G817C的PCR擴增方法，其特征在于：PCR擴增由預變性和30-40次擴增溫度循環(huán)組成，循環(huán)條件為95℃預變性10min，94℃變性30sec，55℃退火30sec，72℃延伸30sec，循環(huán)30-40次。循環(huán)結束后72℃補齊延伸10min后反應結束。?