[發明專利]一種測定CoQ10抑制紫外光B輻射損傷的方法

無效

• 申請號: 201210593009.9
• 申請日: 2012-12-31
• 公開（公告）號: CN103207276A
• 公開（公告）日: 2013-07-17
• 發明（設計）人: 張文娟;黨磊;趙仁濱
• 申請（專利權）人: 北京天辰空間生物醫藥研發有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;C12Q1/68
• 代理公司: 北京華誼知識產權代理有限公司 11207
• 代理人: 劉月娥

1.一種測定CoQ10抑制紫外光B輻射損傷的方法，其特征在于，測定步驟如下：

（1）CoQ10用水、甲醇、乙醇、DMSO溶解；

（2）HaCat細胞用完全培養基調整細胞濃度為4-10×10⁴/孔，接種于細胞板中，貼壁后換用1％、2％、3％、5％的低血清培養基，同時加入（1）所述的CoQ10溶液，CoQ10終濃度為1uM、5uM、10uM；并使用濃度為5mJ/cm²或20mJ/cm²的UVB照射，分別以照射后4h－24h不同時間點為觀察時間點；

（3）HaCat細胞培養4h--24h后，用ELISA試劑盒檢測各組細胞內CPDs的含量；CoQ10劑量相關性的檢測；

（4）所述HaCat細胞UVB輻射6h--24h，提取RNA，QPCR檢測細胞因子IL-1α、IL-6、IL-8和TNF-α基因表達水平；

所述HaCat細胞UVB輻射6h--24h，采用Luminex檢測試劑盒檢測細胞因子IL-1α、IL-6、IL-8和TNF-α分泌情況；

（5）所述HaCat細胞UVB輻射6h后，采用western-blot方法檢測各組NF-κB表達情況。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的CoQ10劑量相關性的檢測包括：六孔板培養HaCat細胞，選取照射后繼續培養4h和24h作為觀測時間點，每個時間點都設六組：UVB未照射組（-UVB）、單純UVB照射組（UVB）、微載體組（NLC）、CoQ10劑量1μM組（UVB+1μM）、CoQ10劑量5μM組（UVB+5μM）、CoQ10劑量10μM組（UVB+10μM），每個組重復兩個孔，每個孔接2×10⁵的細胞量，共需4塊六孔板，4.8×10⁶的細胞量；

照射劑量為5mJ/cm²，4h-24h之后分別收集細胞，用試劑盒提取DNA，采用硫酸魚精蛋白ELISA法檢測CPDs。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的CoQ10具有生物活性物質特點CoQ10。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述的生物活性物質特點是一種脂溶性醌,其結構類似于維生素K，因其母核六位上的側鏈——聚異戊烯基的聚合度為10而得名，是一種醌環類化合物；分子式C59H90O4，分子量863.36。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的CoQ10具有抑制光輻射損傷的作用；CoQ10的應用是將CoQ10添加入化妝品中，使化妝品具有抑制光輻射的功效；所述的化妝品包括美白爽膚水、面霜、面膜。