[發明專利]一種檢測毒死蜱農藥殘留的免疫傳感器制備方法

無效

• 申請號: 201210589025.0
• 申請日: 2012-12-31
• 公開（公告）號: CN103018438A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發明（設計）人: 孫霞;曹瑤瑤;王相友;劉君峰;鞏智利
• 申請（專利權）人: 山東理工大學
• 主分類號: G01N33/544
• 分類號: G01N33/544
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明提供一種檢測毒死蜱農藥殘留的免疫傳感器制備方法，屬于生物傳感器技術領域。

背景技術

在農業生產中，農藥在控制農作物病蟲害，保障農產品穩產、高產方面起到至關重要的作用，但是，農藥的不合理使用，不僅造成了水環境、土壤、大氣的污染，也導致了農產品中農藥殘留超標，引起人體中毒以及貿易壁壘。當前，我國生產和使用的殺蟲劑絕大多數品種為有機磷和氨基甲酸酯類農藥，其中毒死蜱的生產使用逐漸增加，毒死蜱在人體中主要分布于肝臟、腎臟、脾臟等血流量較高的器官。它可以抑制膽堿酯酶活性，對人體有致畸作用，甚而對人體的中樞神經產生影響。因此，建立一種快速、靈敏、安全可靠的毒死蜱農藥殘留的檢測方法迫在眉睫。

傳統的農藥殘留檢測主要有：光譜法（紅外光譜法、熒光光譜法、紫外-可見光、化學發光法等）、色譜法（氣相色譜（GC）、液相色譜（LC）、高效液相色譜（HPLC））、氣-質聯用（GC-MS），液-質聯用（LC-MS）、酶聯免疫（ELISA）等。雖然這些方法的選擇性好、靈敏度高和準確度高，同時檢測多種元素或化合物，但其需要昂貴的儀器設備,樣品的前處理過程繁瑣、費時,并且對分析人員的技術水平要求很高,不適于現場快速檢測。因此,人們迫切需要快速、可靠、經濟和適合于現場應用的快速檢測方法。于是,廉價、快速、可信、敏感的生物傳感器應運而生。與傳統的分析方法相比,生物傳感器具有如下特點：（1）較高的選擇性，因此不需要對被測組分進行分離，即不用對樣品進行預處理。（2）結構簡單，體積小，使用方便，特別是便攜式的生物傳感器，非常有利于食品質量的市場快速評價。（3）可實現連續在線檢測，使食品加工過程的質量控制變得簡便。（4）響應速度快，樣品用量少，與其他大型分析儀器相比，生物傳感器制作成本低，且可反復使用。因此本文嘗試制備一種毒死蜱殘留的免疫傳感器。

發明的目的在于提供一種能克服上述方法的缺陷、且操作簡單、靈敏度高，選擇性好的毒死蜱農藥殘留檢測的免疫傳感器制備方法。

其技術方案為：一種檢測毒死蜱農藥殘留的免疫傳感器制備方法，其特征在于：制備出一種新型的納米復合物多壁碳-硫堇-殼聚糖，從而增大電極表面的電流信號，加大檢測范圍，降低免疫傳感器的檢測限。

所述的一種檢測毒死蜱農藥殘留的免疫傳感器制備方法，其特征在于：多壁碳納米管具有的良好的化學穩定性，導電性和極高的機械強度；殼聚糖具有良好的生物相容性與成膜性，可以增大多壁碳納米管在溶液里的溶解性，解決了多壁碳納米管難溶解的問題；硫堇作為一種電子傳遞的媒介，可以很大程度上提高電子的傳輸，進一步增強了多壁碳-硫堇-殼聚糖納米復合物的導電性。

所述的一種檢測毒死蜱農藥殘留的免疫傳感器制備方法，其特征在于：實驗條件的優化，主要包括免疫傳感器的修飾及表征過程，有關實驗參數的優化（納米復合物中硫堇的濃度、測試底液的pH、孵育時間等）；所制備出電流型免疫傳感器的工作曲線；免疫傳感器性能檢測包括重現性、穩定性、特異性、再生性以及免疫傳感器對蔬菜樣品加標回收率的測定。所制備的免疫傳感器的工作曲線為：y?=?9.5771?lgC?(ng/mL)?+?16.220，(R²=0.9964)，其檢測限為0.046ng/mL；免疫傳感器性能檢測包括特異性、穩定性、重現性、再生性以及免疫傳感器對多種果蔬樣品回收率的測定。

其制備原理為：本發明利用功能化的多壁碳納米管，具有羧基（-COOH），可以提供大的外部表面面積，且可以促進電子轉移；殼聚糖富含氨基（-NH₂），是多壁碳納米管很好的分散劑，具有較高的成膜性及生物相容性；硫堇作為電子傳遞的媒介，具有大量的氨基（-NH₂），將三種物質按一定比例混合，從而制備出多壁碳-硫堇-殼聚糖納米復合物；而作為交聯劑的戊二醛可以與氨基（-NH₂）結合，因此可以將多壁碳-硫堇-殼聚糖納米復合物中殼聚糖、硫堇與毒死蜱抗體連接；用牛血清蛋白（BSA）封閉抗體上的非特異性結合位點后即可制備得到一種新型的、便捷的免疫傳感器。

為達到以上目的，采取以下技術方案實現：一種檢測毒死蜱農藥殘留的免疫傳感器制備方法，其特征在于：（1）基于新型納米材料多壁碳-硫堇-殼聚糖納米復合物，增大電流相應；（2）通過戊二醛將多壁碳-硫堇-殼聚糖納米復合物中硫堇、殼聚糖與抗體中所含的氨基（-NH₂）很好地結合，從而實現抗體的固定。