[發(fā)明專利]東亞對(duì)開蕨種質(zhì)試管保存及遷地保護(hù)方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210588641.4
• 申請(qǐng)日: 2012-12-29
• 公開（公告）號(hào): CN103004606A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙春莉;趙和祥;顧德峰;李金英;黃翔童;陳麗飛;董然;劉曉嘉;劉淑英;姜立新
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 長春市東師專利事務(wù)所 22202
• 代理人: 張鐵生

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說是瀕危珍稀植物東亞對(duì)開蕨種質(zhì)保存方法和遷地繁育保護(hù)方法。

背景技術(shù)

???東亞對(duì)開蕨（Phyllitis?japonica?Kom.）也稱東北對(duì)開蕨、日本對(duì)開蕨、對(duì)開蕨。既具有觀賞價(jià)值，又有藥用價(jià)值。屬鐵蕨科，多年生常綠草本植物。根狀莖短，橫臥或斜生，根細(xì)長，多橫走。世界稀有物種，我國僅一屬一種，國家二級(jí)珍稀瀕危保護(hù)植物。產(chǎn)于長白山南麓和西側(cè)局部地區(qū)，主要分布于吉林省長白朝鮮族自治縣、臨江、集安、撫松等的一些狹窄區(qū)域，并且分布星散。對(duì)開蕨喜空氣濕度大、避風(fēng)陰濕、腐殖土豐厚且多有坡度的森林土壤環(huán)境，東亞對(duì)開蕨自然貯量極少。這些地區(qū)現(xiàn)沒有劃入長白山自然保護(hù)區(qū)保護(hù)范圍，目前尚無明確的保護(hù)措施。有研究表明對(duì)開蕨在長白山區(qū)為衰退種，近年來隨著森林生態(tài)環(huán)境逐年惡化，其長勢日益不良，數(shù)量逐減，有的分布區(qū)域已絕跡。因此，為保護(hù)這一珍稀瀕危植物資源，防止自然和人為因素對(duì)其造成毀滅性破壞，迫切需要人工對(duì)其繁殖和保護(hù)。

人工繁殖需要大量的種質(zhì)，而東亞對(duì)開蕨自然貯量稀少，大量采集野生種質(zhì)，這種行為的本身就會(huì)給本來就脆弱生態(tài)環(huán)境造成傷害，以至于傷害大于保護(hù)的后果。人工長期傳代培養(yǎng)也會(huì)造成品種退化，不適合野生環(huán)境下生長繁殖。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了保護(hù)瀕危珍稀植物東亞對(duì)開蕨，擴(kuò)大野生種群的面積，而提供一種東亞對(duì)開蕨種質(zhì)保存方法和遷地保護(hù)方法。

一種東亞對(duì)開蕨種質(zhì)保存方法，它包括：將原葉體接種于1/4?MS～MS（全）+蔗糖25-30g/L培養(yǎng)基中，置于光照培養(yǎng)箱內(nèi)，光照強(qiáng)度200-300lx；光照5-7h/d，溫度為14-16℃；

所述的培養(yǎng)基為1/2MS+蔗糖30/L；

所述溫度為15℃；

所述的培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，每12個(gè)月更換一次。

東亞對(duì)開蕨遷地保護(hù)方法，它包括：

1）采集東亞對(duì)開蕨含有成熟孢子囊的孢子葉，將剝出的孢子囊放在經(jīng)滅菌后的濾紙上，小心壓碎孢子囊，散出其內(nèi)的孢子，連同濾紙片一同接種于MS+蔗糖20g/L、培養(yǎng)基中；100-200lx散射光下，光照12h/d；白天溫度25-26℃，晚間20-22℃，孢子萌發(fā)為原葉體團(tuán)；

2）將原葉體團(tuán)切成小塊接種于1/2?MS?-MS（全）+蔗糖培養(yǎng)基中繼代與增殖；

3）將部分原葉體按上述的東亞對(duì)開蕨種質(zhì)保存方法保存；其余出瓶移栽以草炭為基質(zhì)的花盆中，溫室培養(yǎng)30天，噴施0.1%?KH₂PO₄孢子體誘導(dǎo)，當(dāng)幼苗成長至4片葉以上，每年六月下旬遷地移栽；

4）每12個(gè)月轉(zhuǎn)接一次，每次轉(zhuǎn)接時(shí)將一部分原葉體繼續(xù)保存培養(yǎng)，其余進(jìn)行增殖繼代、試管外以草炭為基質(zhì)誘導(dǎo)孢子體植株形成、遷地移栽。

本發(fā)明提供了一種東亞對(duì)開蕨種質(zhì)保存方法，將原葉體接種于1/4?MS～MS（全）+蔗糖25-30g/L培養(yǎng)基中，置于光照培養(yǎng)箱內(nèi)，光照強(qiáng)度200-300lx；光照5-7h/d，溫度為14-16℃；12個(gè)月后，幾乎沒有生長和增殖，狀態(tài)與起初培養(yǎng)時(shí)相似，將其轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)條件下后，仍能正常增殖與生長；培養(yǎng)60天后，增值率為4.5左右，孢子體也可以正常形成；已進(jìn)行了5年的保存處理；本發(fā)明還提供了東亞對(duì)開蕨遷地保護(hù)方法，將保存的原葉體每年繼代繁殖，試管外以草炭為基質(zhì)誘導(dǎo)孢子體植株形成、遷地移栽；在長白山區(qū)選取了與對(duì)開蕨原生境基本相似的3個(gè)地點(diǎn)作為遷地移栽供試區(qū)；每個(gè)地點(diǎn)栽植100株；經(jīng)生長4年，長勢良好，真正達(dá)到對(duì)瀕危植物的保護(hù)。

附圖說明

圖1沒破碎的孢子葉孢子120d生長狀態(tài)；

圖2?破碎孢子囊后的孢子60d培養(yǎng)；

圖3?液體培養(yǎng)40d原葉體生長狀態(tài)；

圖4?液體培養(yǎng)70d原葉體生長狀態(tài)；

圖5?固體培養(yǎng)孢子120d生長狀況；

圖6?接種時(shí)原葉體；

圖7?60d培養(yǎng)后的原葉體；

圖8?栽植120d后的孢子體狀況；

圖9?分株后的孢子體植株；

圖10?對(duì)開蕨組培苗溫室馴化；

圖11?臨江市洋魚頭村生長狀況；

圖12?敦化市馬五店山區(qū)2年栽植生長狀況；

圖13?野外3年栽植生長狀況。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1???孢子萌發(fā)