[發(fā)明專利]OGP-rhLeptin融合蛋白轉(zhuǎn)基因工程菌株

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210585619.4
• 申請日: 2012-12-31
• 公開（公告）號: CN103031268A
• 公開（公告）日: 2013-04-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 余瓊
• 申請（專利權(quán)）人: 黑龍江大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/62;C12N15/63;C07K19/00;C12R1/19
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種融合蛋白轉(zhuǎn)基因工程菌株。

背景技術(shù)

老年人骨質(zhì)疏松發(fā)病率較高，全球有2億骨質(zhì)疏松患者，并且女性多于男性。根據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）的標準，美國國家健康和營養(yǎng)調(diào)查（NHANES?Ⅲ，1988~1994年）結(jié)果表明，骨質(zhì)疏松嚴重影響老年人生活質(zhì)量，50歲以上人群中，1/2的女性、1/5的男性在他們的一生中都會出現(xiàn)骨質(zhì)疏松性骨折，一旦患者經(jīng)歷了第一次骨質(zhì)疏松性骨折，繼發(fā)性骨折的危險明顯加大。中國老年人居于世界首位，現(xiàn)有骨質(zhì)疏松癥患者9000萬，占總?cè)丝诘?.1%。隨著社會老齡化的進程，骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病率呈上升趨勢，預(yù)計到2050?年將增加到2.21億，那時全世界一半以上的骨質(zhì)疏松性骨折將發(fā)生在亞洲，絕大部分在中國。有學者對1995~1996年美國骨質(zhì)疏松、心肌梗死、卒中和乳腺癌的年發(fā)生數(shù)進行調(diào)查顯示，每年發(fā)生骨質(zhì)疏松性骨折150萬次，其中椎體骨折70萬次，腕部骨折20萬次，髖部骨折30萬次，其它骨折30萬次。

肥胖與骨量關(guān)系臨床觀察表明，肥胖與骨密度(BMD)提高有關(guān)。肥胖是骨量的保護因素，超重和肥胖的婦女絕經(jīng)后較同齡非超重婦女骨量高且骨丟失較慢。體重下降是絕經(jīng)早期骨丟失的危險因素，提高體重指數(shù)可減緩絕經(jīng)后骨丟失。但肥胖也常常引發(fā)高血糖、高血壓、高血脂、高血粘、高尿酸、高胰島素血癥、冠心病、腦卒中、下肢靜脈曲張、脂肪肝、膽石癥、睡眠呼吸暫停癥、糖尿病、痛風癥及關(guān)節(jié)炎，是很多疾病的誘因之一。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決目前尚無同時有效治療骨質(zhì)疏松和肥胖藥品的缺陷，而提供的一種OGP-rhLeptin融合蛋白轉(zhuǎn)基因工程菌株。

OGP-rhLeptin融合蛋白轉(zhuǎn)基因工程菌株名為大腸桿菌BL21（DE3-OGP/Obese’），大腸桿菌BL21（DE3-OGP/Obese’）按以下步驟制備：

一、將含有OGP-rhLeptin融合蛋白基因的質(zhì)粒載體pUC（OGP/Obese’）用BamH?I和EcoRⅠ雙酶切，獲得OGP-rhLeptin融合蛋白的DAN片段；

二、用BamHI和EcoRⅠ雙酶切質(zhì)粒pGEX-6P-1；

三、OGP-rhLeptin融合蛋白的DAN片段與經(jīng)過雙酶切的載體pGEX-6P-1進行酶連接，然后16℃放置連接過夜，得到載體pGEX-OGP/Obese’；

四、用載體pGEX-OGP/Obese’轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21（DE3），選擇陽性重組子，即獲得OGP-rhLeptin融合蛋白轉(zhuǎn)基因工程菌大腸桿菌BL21（DE3-OGP/Obese’）。

本發(fā)明中OGP-rhLeptin融合蛋白的基因序列如SEQ?ID?NO：1所示。

本發(fā)明中OGP-rhLeptin融合蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：2所示。

本發(fā)明OGP-rhLeptin融合蛋白采用人為改造的Leptin和成骨生長肽基因編碼翻譯而成。具有降低使用者體重，并防治骨質(zhì)疏松的效果。

本發(fā)明用于治骨質(zhì)疏松和肥胖的OGP-rhLeptin融合蛋白微生物制劑，不產(chǎn)生拮抗反應(yīng)，使用安全。

本發(fā)明OGP-rhLeptin融合蛋白轉(zhuǎn)基因工程菌大腸桿菌BL21（DE3-OGP/Obese’）發(fā)酵產(chǎn)生的OGP-rhLeptin融合蛋白共52個氨基酸。本發(fā)明采用生物基因工程手段獲得大腸桿菌BL21（DE3-OGP/Obese’）。采用本發(fā)明基因工程菌大腸桿菌BL21（DE3-OGP/Obese’）可大規(guī)模發(fā)酵生產(chǎn)OGP-rhLeptin融合蛋白，具有廣泛應(yīng)用前景。本發(fā)明為治療骨質(zhì)疏松和肥胖奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)。

具體實施方式

本發(fā)明技術(shù)方案不局限于以下所列舉具體實施方式，還包括各具體實施方式間的任意組合。

具體實施方式一：本實施方式OGP-rhLeptin融合蛋白轉(zhuǎn)基因工程菌株名為大腸桿菌BL21（DE3-OGP/Obese’），大腸桿菌BL21（DE3-OGP/Obese’）按以下步驟制備：

一、將含有OGP-rhLeptin融合蛋白基因的質(zhì)粒載體pUC（OGP/Obese’）用BamH?I和EcoRⅠ雙酶切，獲得OGP-rhLeptin融合蛋白的DAN片段（OGP/Obese’）；

二、用BamHI和EcoRⅠ雙酶切質(zhì)粒pGEX-6P-1；

三、OGP-rhLeptin融合蛋白的DAN片段與經(jīng)過雙酶切的載體pGEX-6P-1進行酶連接，然后16℃放置連接過夜，得到載體pGEX-OGP/Obese’；