[發明專利]用于治骨質疏松癥和肥胖的OGP-rhLeptin融合蛋白及編碼該融合蛋白的核酸

無效

• 申請號: 201210585618.X
• 申請日: 2012-12-31
• 公開（公告）號: CN103012598A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發明（設計）人: 余瓊
• 申請（專利權）人: 黑龍江大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;A61P19/10;A61P3/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種融合蛋白及編碼該融合蛋白的核酸。

背景技術

老年人骨質疏松發病率較高，全球有2億骨質疏松患者，并且女性多于男性。根據世界衛生組織（WHO）的標準，美國國家健康和營養調查（NHANES?Ⅲ，1988~1994年）結果表明，骨質疏松嚴重影響老年人生活質量，50歲以上人群中，1/2的女性、1/5的男性在他們的一生中都會出現骨質疏松性骨折，一旦患者經歷了第一次骨質疏松性骨折，繼發性骨折的危險明顯加大。中國老年人居于世界首位，現有骨質疏松癥患者9000萬，占總人口的7.1%。隨著社會老齡化的進程，骨質疏松癥的發病率呈上升趨勢，預計到2050?年將增加到2.21億，那時全世界一半以上的骨質疏松性骨折將發生在亞洲，絕大部分在中國。有學者對1995~1996年美國骨質疏松、心肌梗死、卒中和乳腺癌的年發生數進行調查顯示，每年發生骨質疏松性骨折150萬次，其中椎體骨折70萬次，腕部骨折20萬次，髖部骨折30萬次，其它骨折30萬次。

肥胖與骨量關系臨床觀察表明，肥胖與骨密度(BMD)提高有關。肥胖是骨量的保護因素，超重和肥胖的婦女絕經后較同齡非超重婦女骨量高且骨丟失較慢。體重下降是絕經早期骨丟失的危險因素，提高體重指數可減緩絕經后骨丟失。但肥胖也常常引發高血糖、高血壓、高血脂、高血粘、高尿酸、高胰島素血癥、冠心病、腦卒中、下肢靜脈曲張、脂肪肝、膽石癥、睡眠呼吸暫停癥、糖尿病、痛風癥及關節炎，是很多疾病的誘因之一。

發明內容

本發明既要降低肥胖者的體重，使之遠離高血糖、高血壓、高血脂、高血粘、高尿酸、高胰島素血癥、冠心病、腦卒中、下肢靜脈曲張、脂肪肝、膽石癥、睡眠呼吸暫停癥、糖尿病、痛風癥及關節炎等風險；同時又增加其骨量，避免骨質疏松的發生，而提供的一種用于治骨質疏松和肥胖的OGP-rhLeptin融合蛋白及編碼該融合蛋白的核酸。

本發明用于治骨質疏松和肥胖的OGP-rhLeptin融合蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：2所示。

本發明上述用于治骨質疏松和肥胖的OGP-rhLeptin融合蛋白的核酸序列如SEQ?ID?NO：1所示。

本發明OGP-rhLeptin融合蛋白采用人為改造的Leptin和成骨生長肽基因編碼翻譯而成。具有降低使用者體重，并防治骨質疏松的效果。

本發明用于治骨質疏松和肥胖的OGP-rhLeptin融合蛋白微生物制劑，不產生拮抗反應，使用安全。

具體實施方式

本發明技術方案不局限于以下所列舉具體實施方式，還包括各具體實施方式間的任意組合。

具體實施方式一：本實施方式用于治骨質疏松和肥胖的OGP-rhLeptin融合蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：2所示。

本實施方式用于治骨質疏松和肥胖的OGP-rhLeptin融合蛋白的核酸序列如SEQ?ID?NO：1所示，該核酸序列由生物工程公司合成，制成含有融合蛋白的核酸的質粒載體pUC（OGP/Obese’）。將pUC（OGP/Obese’）載體用BamH?I和EcoRⅠ雙酶切出來（酶切反應體系如表1所示，酶切反應在37℃條件下反應10h，然后1.5%瓊脂糖凝膠電泳，目的片段用DNA?GEL?EXTRACTION?KIT純化回收），并用BamHI和EcoRⅠ雙酶切pGEX-6P-1（酶切反應體系如表2所示，酶切反應在37℃條件下反應10h，然后0.6%瓊脂糖凝膠電泳，目的片段用DNA?GEL?EXTRACTION?KIT純化回收）；再將本實施方式用于治骨質疏松和肥胖的OGP-rhLeptin融合蛋白的DAN片段（OGP/Obese’）與經過雙酶切的載體pGEX-6P-1的連接（連接反應體系如表3所示）。

表1

表2

表3

融合蛋白的DAN片段與載體pGEX-6P-1?16℃放置連接過夜，得到載體pGEX-OGP/Obese’；然后將載體pGEX-OGP/Obese’轉化到大腸桿菌BL21（DE3）中，選擇陽性重組子命名為大腸桿菌BL21（DE3-OGP/Obese’）。

載體pGEX-6P-1上不含有KpnⅠ酶切位點，本實施方式合成的pGEX-OGP/Obese’均能為KpnⅠ單酶切開，說明本實施方式用于治骨質疏松和肥胖的OGP-rhLeptin融合蛋白基因成功導入質粒pGEX-6P-1中。