[發明專利]防治重樓根腐病的生防菌株KMXU28及其生防菌劑

無效

• 申請號: 201210580217.5
• 申請日: 2012-12-27
• 公開（公告）號: CN103060234A
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發明（設計）人: 余磊;趙建榮
• 申請（專利權）人: 昆明學院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/02;A01P1/00;A01P3/00;A01P21/00;C12R1/125
• 代理公司: 昆明今威專利商標代理有限公司 53115
• 代理人: 楊宏珍

1.一種防治重樓根腐病的生防菌株KMXU28，為枯草芽孢桿菌?(Bacillus?subtilis)，2012年9月21日保藏于中國微生物菌種保藏委員會普通微生物中心，保藏號：CGMCC?NO.?6594。

2.用權利要求1所述的生防菌株KMXU28制備的防治重樓根腐病生防菌劑，其特征在于該生防菌劑經如下步驟得到：

a.?將菌株KMXU28移植到試管中進行一環活化，28℃?培養48小時；試管中的PSA培養基為：稱取200g馬鈴薯，洗凈去皮切碎，加水1000ml煮沸半個小時，紗布過濾，再加20g蔗糖和17g瓊脂，溶解后趁熱紗布過濾，15磅溫度為121℃的蒸氣滅菌20分鐘；

b.?取一環活化后的菌苔移入用1000ml錐形瓶裝的600ml配方為：胰蛋白胨??10g/L，酵母提取物??5g/L，氯化鈉??5g/L，pH7.0的LB培養液中，在120轉/min、28?℃下培養72小時，獲得發酵菌液；

c.?將發酵菌液按接種量1：200培的比例接種于種子罐中、在與b步驟相同的LB培養液中發酵培養，種子罐的溫度為30-32℃，發酵16-18小時后，獲得發酵用菌種；

d.?將發酵用菌種按接種量1：20倍的比例接種于發酵罐中、在與b步驟相同的LB培養液中發酵培養，發酵罐的溫度為30-32℃，發酵72-96小時，當發酵罐中的發酵液中芽孢含量大于或等于85-90%，酸堿度為6.5～7.5時，儲存作為生防菌液；

e.?將生防菌液5000rpm離心6?min，取離心后的菌體與保藏液按1：50?g/ml?配成活性菌劑，成品中活菌總濃度為1×10¹⁰～1×10^11?CFU/ml；菌體保藏液為：0.015mol/L磷酸鹽緩沖液。?