[發明專利]一種評價硫酸鹽還原菌抑制效果的方法

有效

• 申請號: 201210579145.2
• 申請日: 2012-12-27
• 公開（公告）號: CN103901024A
• 公開（公告）日: 2014-07-02
• 發明（設計）人: 聶春梅;陳愛華;方新湘;李敏香;趙燕;王傳萍
• 申請（專利權）人: 中國石油天然氣股份有限公司
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/82
• 代理公司: 北京市中實友知識產權代理有限責任公司 11013
• 代理人: 謝小延

技術領域

本發明涉及一種利用硫酸鹽還原菌細菌測試瓶或自行配制的適合硫酸鹽還原菌生長的培養基（內加指示劑），快速評價殺菌劑或抑制劑對該微生物的殺滅或抑制效果的評價方法。

背景技術

在油田生產中，硫酸鹽還原菌（SRB）的繁殖滋生會引起許多不良后果，如油田水處理設備的腐蝕破壞、地層堵塞、油層污染等，給油田生產造成巨大損失。國內外科技工作者對控制SRB的生長進行了大量的探索，對SRB危害的監控和殺菌劑效果的檢測都需要我們及時檢測SRB，因而，對殺菌劑和抑制劑的應用效果的評選和及時檢測就顯得尤為重要。

國內外科技人員對于硫酸鹽還原菌的抑制效果的檢測，主要集中在3個層面：一是傳統的檢測方法，培養法及顯微鏡直接計數法；二是基因層面，基于SRB種屬的16SrDNA序列的定性檢測，如基因芯片以及FISH技術對SRB的定量和定性檢測，APS還原酶基因和異化型亞硫酸鹽還原基因進行定性檢測；三是蛋白層面，主要是通過免疫吸附的原理得以實現，如已經申請專利的基于APS還原酶的SRB的快速檢測試劑盒。到目前為止，還沒有一種被公認較完善的檢測方法。其中，顯微鏡技術最大的特點是快速，但需特定的染料及受過培訓的操作人員。由于該技術不能分辨細菌的死活，所以檢測結果往往偏高。通過檢測細菌構成物測定SRB的儀器有很多，但因測定的具體構成物不同，分析結果往往有差異。隨著分子生物學技術的飛速發展,分子生物學方法已經滲透到環境生物地球化學的許多領域，但是由于專業要求較高，輔助檢測設備操作難度大，檢測費用較高，不適于普遍適用。

培養法是我國各油田過去多年來一直采用的SRB的檢測方法，它是根據API?RP-38美國石油學會推薦的地下注入水分析方法中的絕跡逐漸稀釋法進行的。該方法是迄今為止應用最多也是最好的方法，可靠性較高。目前，油田系統內SRB菌的計數主要執行中國石油天然氣行業標準SY/T5329-94。對殺菌劑/抑制劑藥效的評價也多用此法。即在一定體積的污水樣中，靜態或動態地加入殺菌劑/抑制劑，恒溫培養若干小時后，再利用硫酸鹽還原菌測試瓶做培養測試分析。這種方法存在的問題是：試驗周期長，包括前期反應和后期評價兩個過程，尤其在前期抑制劑的評選過程中，工作量繁瑣，不能及時有效地指導生產實踐。

發明內容

本發明的目的是提供一種用于快速評價硫酸鹽還原菌殺滅/抑制效果的方法，可簡單快速地評選殺菌劑/抑菌劑，并方便觀察，去掉了加入抑制劑/殺菌劑的單獨反應過程，將反應和評價過程合二為一，縮短了評價檢測時間，達到快速評價抑制配方的目的。

本發明所所述的快速評價硫酸鹽還原菌抑制效果的方法，是以市場上流通的、內裝硫酸鹽還原菌測試液的硫酸鹽還原菌測試瓶為反應場所，測試液體積范圍為5～10ml；或者以自行配制的、內加指示劑的適合硫酸鹽還原菌優勢生長的培養基為反應場所，培養基成分以質量含量為單位，由磷酸氫二鉀0.1～1‰，硫酸鹽1～10‰，亞鐵鹽0.1～1‰，氯化物1～10‰，抗壞血酸0.1～1‰，L-Cys半胱氨酸0.1～1‰，乳酸鹽2～10‰和蒸餾水995.6～966‰組成，pH=6.5～7.0，該培養基經滅菌處理后裝在帶有密封蓋的厭氧瓶中，體積范圍為5～10ml；以廣泛存在于土壤、海水、河水、地下管道以及油氣井等缺氧或兼性厭氧環境中，以硫酸根為底物進行還原反應，適宜生長的溫度為25～60℃，pH為6～9的硫酸鹽還原菌為抑制對象；以生物抑制劑/化學殺菌劑/生物-化學復配抑制劑為評價對象，其中，生物抑制劑為以硝酸根/亞硝酸根為電子受體的反硝化細菌菌液及其營養液，化學殺菌劑包括氧化性殺菌劑，如氯氣、次氯酸鈉、漂白粉、臭氧、氯胺等；非氧化性殺菌劑，如氯化十二烷基二甲基芐基銨、溴化十二烷基二甲基芐基銨、二硫氰基甲烷等；重金屬化合物，如氧化汞、氯化汞、氟化汞等；粘泥殺菌劑，如松香胺、過氧化氫、又胍聚合物等，生物-化學復配抑制劑則為上述兩種或兩種以上制劑的任意組合。若在3天之內，測試瓶中的鐵釘沒有變黑或者產生明顯的黑色沉淀物，或者厭氧瓶中的帶有指示作用的培養液沒有變黑或產生明顯的黑色沉淀物，則表明該條件下評選出來的藥劑種類和濃度可在0～24h內將該污水中的硫酸鹽還原菌控制在0～5mg/l。該控制指標遠遠低于SY-T5329-1994碎屑巖油藏注水水質推薦指標（SRB＜25個/ml）。