[發明專利]一種鬧羊花毒素Ⅲ單體的分離純化方法

有效

• 申請號: 201210577690.8
• 申請日: 2012-12-27
• 公開（公告）號: CN103012326A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發明（設計）人: 文煥松;夏柯;姚志容;李啟發;郭建華;劉丁
• 申請（專利權）人: 成都普思生物科技有限公司
• 主分類號: C07D303/14
• 分類號: C07D303/14;C07D301/32
• 代理公司: 成都天嘉專利事務所(普通合伙) 51211
• 代理人: 趙麗

1.一種鬧羊花毒素Ⅲ單體的分離純化方法，其特征在于：以杜鵑花科植物羊躑躅藥材為原料，通過提取、萃取、制備液相系統分離及干燥得鬧羊花毒素Ⅲ單體，具體包括如下工藝步驟：

A?提取

將干燥的羊躑躅藥材粉碎成1～4mm的粗粉，加入醇溶液，于60～100℃提取3～5次，每次1～3小時，提取液過濾，合并過濾液，60～90℃濃縮回收乙醇，得相對密度1.0～1.1的濃浸膏；

B?萃取總毒素

將步驟A所得的濃浸膏加水稀釋至60℃時相對密度為0.7～0.9g/mL，然后加入等體積的乙酸乙酯萃取3～5次，分取上層溶液，45～60℃減壓濃縮至干，所得固體物用質量/體積=10～15的甲醇超聲溶解，并用0.45μm有機膜過濾，得澄清溶液；

C?通過制備型高效液相色譜分離鬧羊花毒素Ⅲ單體

取步驟B所得的濾液進樣，進行鬧羊花毒素Ⅲ單體的制備分離，紫外檢測器在線監測針對性收集鬧羊花毒素Ⅲ的制備餾分溶液，得鬧羊花毒素Ⅲ單體溶液；

D?干燥制備鬧羊花毒素Ⅲ單體產品

取步驟D所得鬧羊花毒素Ⅲ單體溶液，于45℃～75℃減壓濃縮至干，再將固體物于45～85℃與另器盛放的五氧化二磷共存，真空干燥至恒重，收集干品，即得鬧羊花毒素Ⅲ單體產品。

2.如權利要求1所述鬧羊花毒素Ⅲ單體的分離純化方法，其特征在于：步驟A所述醇溶液為甲醇或乙醇溶液，它們的濃度均為G/G=70～90%。

3.如權利要求1或2所述鬧羊花毒素Ⅲ單體的分離純化方法，其特征在于：步驟A所述醇溶液的加入量為藥材重量:醇溶液體積=1Kg:(6～10)L。

4.如權利要求1所述鬧羊花毒素Ⅲ單體的分離純化方法，其特征在于：步驟C所述制備型高效液相色譜采用填料為C₁₈的色譜柱、流動相組成為：體積分數65～85%的甲醇水溶液。

5.如權利要求1所述鬧羊花毒素Ⅲ單體的分離純化方法，其特征在于：步驟C所述紫外檢測器檢測波長為210nm。

6.如權利要求1所述鬧羊花毒素Ⅲ單體的分離純化方法，其特征在于：步驟C所述制備型高效液相色譜分離前，通過液-質聯用方法或氣-質聯用、核磁共振碳譜、氫譜方法確定高效液相色譜中鬧羊花毒素Ⅲ單體的峰形。

7.如權利要求1或6所述鬧羊花毒素Ⅲ單體的分離純化方法，其特征在于所述液-質聯用方法，采用填料為C₁₈的色譜柱，流動相組成為：體積分數65～85%的甲醇水溶液，柱溫為室溫，檢測波長為210nm，根據質譜正離子檢測結果，確定鬧羊花毒素Ⅲ單體在液相色譜中所對應的峰形及歸屬。