[發明專利]一種放射核素131I-單克隆抗體標記物的制備方法

有效

• 申請號: 201210575785.6
• 申請日: 2012-12-26
• 公開（公告）號: CN103893786A
• 公開（公告）日: 2014-07-02
• 發明（設計）人: 楊治華;冉宇靚;周薇;于山
• 申請（專利權）人: 上海海抗中醫藥科技發展有限公司
• 主分類號: A61K51/10
• 分類號: A61K51/10;A61P35/00;A61K101/02
• 代理公司: 北京戈程知識產權代理有限公司 11314
• 代理人: 程偉

技術領域

本發明涉及一種放射核素¹³¹I-單克隆抗體標記物的制備方法，以及通過該方法獲得的放射核素¹³¹I-單克隆抗體標記物在制備用于診斷和/或治療腫瘤的產品中的用途。?

背景技術

抗腫瘤單克隆抗體因其特異性好，結合能力強的優勢，可以用于放射免疫導向治療中作為載體運載起殺傷作用的放射核素，將抗體分子標記的放射核素在患者體內有效地運載至腫瘤局部，殺傷腫瘤，起到治療腫瘤的重要作用。目前已經有多種特異的抗腫瘤單克隆抗體供我們懸選擇，包括抗CD20抗體、抗癌胚抗原（CEA）抗體、抗表皮生長因子受體家族成員2（HER2）抗體等。而目前常用的放射性同位素有³H、¹⁴C、¹³¹I和¹²⁵I等，其中放射性碘放出γ-射線，較易獲得較高效率而精確的測量，同時放射性碘的半衰期較短，尤其是¹³¹I的半衰期只有8.05天，標記物可以短時間的衰變使放射性降低以便后期處理，因而在治療人體疾病方面及某些情況下的放射顯像診斷方面，放射性¹³¹I有很大優勢。?

制備高放射比度、高放射化學純度與免疫結合活性好的放射核素?¹³¹I-單克隆抗體標記物對于腫瘤的放射免疫導向治療來說，無疑具有非常重要的意義。具有高度腫瘤特異性和體內靶向腫瘤特性的抗腫瘤單克隆抗體（以下簡稱為單抗），在標記可有效殺傷腫瘤的放射核素¹³¹I之后，在患者體內可以有效地將放射核素¹³¹I攜帶運載至腫瘤局部，從而有效地殺傷腫瘤，起到治療腫瘤的作用，并可能用于某些情況下顯像腫瘤。然而，想要有效地將放射核素¹³¹I攜帶運載至腫瘤局部，除了要求放射核素¹³¹I-單克隆抗體標記物具備高比度、高純度等必要的藥學特征外，最重要的就是要求放射核素¹³¹I-單克隆抗體標記物在標記后仍然保持良好的免疫結合活性，這樣才能在體內有效地與腫瘤細胞結合，?從而將放射核素¹³¹I攜帶運載至腫瘤局部。?

按照現有業界公知的相關技術方法，采用適當的方法標記單克隆抗體，很容易獲得高比放射性的放射核素¹³¹I-單克隆抗體標記物。常用的標記方法有：氯胺T法、乳過氧化物酶法（LPO）、Iodogen碘化法、酰化試劑（Bolton和Hunter試劑）法、NBS（溴代琥珀酰亞胺）法等。標記產物的純化也應盡量采用溫和的方法，避免在純化操作中已受潛在損傷的蛋白質，再經標記反應時所受的損傷后活性顯著降低。?

氯胺T法標記效率高、重復性好、試劑便宜易得，是目前使用最多的碘標記方法。乳過氧化物酶法（LPO）反應溫和，對抗原、抗體免疫活性影響小，已被廣泛應用。缺點是標記率較低，一般為20～40%。Iodogen碘化法具有標記率高、反應體積小（3ml水平）、可用低濃度的?¹²⁵I原料、對多肽激素和蛋白質的免疫活性損失小、穩定等優點，系常規的碘化方法之一。酰化試劑（Bolton和Hunter試劑）法避免了蛋白質與氧化劑的接觸，又避免了與放射性碘原子的直接接觸，可防止碘源中有害物質對蛋白質的損傷，適用于標記缺乏酪氨酸的蛋白質或酪氨酸在活性中心，引入碘原子后會引起蛋白質的失活。其缺點是標記技術比較復雜，需要接觸較多的放射性，經二步反應，碘標記率比較低。一般認為此法不宜標記短肽，而適于分子量大于1萬的蛋白質。NBS法是近年來發展起來并已廣泛應用的一種新的方法，該方法采用NBS作為氧化劑使碘離子（¹³¹I^-）氧化成分子狀態的碘分子（¹³¹I²），而碘原子在0價或+1價態就能直接取代單抗分子上的酪氨酸殘基上羥基鄰位的氫原子，從而使¹³¹I通過取代反應共價結合在單抗的抗體分子上。其特點是標記過程溫和，相對的標記損傷小，產物無毒，易于純化。?