[發(fā)明專利]一種具備疏密結(jié)構(gòu)的細(xì)菌纖維素皮膚修復(fù)材料及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210575502.8
• 申請日: 2012-12-26
• 公開（公告）號: CN103083112A
• 公開（公告）日: 2013-05-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李喆;楊敬軒;張云;鄭羿;王利群;王華平;陳仕艷;洪楓
• 申請（專利權(quán)）人: 東華大學(xué)
• 主分類號: A61F2/10
• 分類號: A61F2/10;A61L27/20;A61L27/60
• 代理公司: 上海天翔知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31224
• 代理人: 呂伴

1.一種具備疏密結(jié)構(gòu)的細(xì)菌纖維素皮膚修復(fù)材料，其特征是：所述的具備疏密結(jié)構(gòu)的細(xì)菌纖維素皮膚修復(fù)材料是由兩層結(jié)合緊密的細(xì)菌纖維素膜構(gòu)成，所述的兩層結(jié)合緊密的細(xì)菌纖維素膜為致密層與疏松層；所述的結(jié)合緊密是指所述致密層的纖維素微纖絲與所述疏松層的纖維素微纖絲通過β-1,4-葡萄糖鏈中的分子內(nèi)與分子間氫鍵結(jié)合，形成分子層，層與層之間也通過分子內(nèi)與分子間氫鍵結(jié)合，無明顯物理分層；

其中所述致密層中的纖維素含量0.7×10^-2～1.0×10^-2g/cm³，所述疏松層中的纖維素含量0.2×10^-2～0.5×10^-2g/cm³。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種具備疏密結(jié)構(gòu)的細(xì)菌纖維素皮膚修復(fù)材料，其特征在于，所述的細(xì)菌纖維素膜是由菌種消耗糖源，分泌纖維素微纖絲通過分子內(nèi)與分子間氫鍵結(jié)合形成；所述的菌種是指能夠生物合成纖維素的微生物，包括：木醋桿菌、產(chǎn)醋桿菌、醋化桿菌、巴氏醋桿菌、葡萄糖桿菌、農(nóng)桿菌、根瘤菌、八疊球菌、洋蔥假單胞菌、椰毒假單胞菌或空腸彎曲菌中的一種或幾種。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種具備疏密結(jié)構(gòu)的細(xì)菌纖維素皮膚修復(fù)材料，其特征在于，所述的具備疏密結(jié)構(gòu)的細(xì)菌纖維素皮膚修復(fù)材料的厚度為8～10mm，其中所述疏松層的厚度為3～5mm。

4.如權(quán)利要求1所述的一種具備疏密結(jié)構(gòu)的細(xì)菌纖維素皮膚修復(fù)材料的制備方法，其特征是包括以下步驟：

1）發(fā)酵培養(yǎng)液的調(diào)配；

發(fā)酵培養(yǎng)液組分，以質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計，單位為wt%：葡萄糖、果糖、蔗糖或甘露醇2～5，蛋白胨0.05~0.5，酵母膏0.05~0.5，檸檬酸0.01~0.1，磷酸氫二鈉0.02~0.2，磷酸二氫鉀0.01~0.1，余量為水；

發(fā)酵培養(yǎng)液的pH為4.0～6.0；

將上述組分混合后經(jīng)高壓蒸汽滅菌后紫外輻照并冷卻至室溫，通純氧，即得發(fā)酵培養(yǎng)液；

2）菌種擴(kuò)培；

將所述的發(fā)酵培養(yǎng)液接種和擴(kuò)培；擴(kuò)培程度：菌種細(xì)胞數(shù)目在2×10⁵～2×10⁷個/ml；

3）靜置培養(yǎng)；

將擴(kuò)培后的菌液轉(zhuǎn)移至裝有發(fā)酵培養(yǎng)液的培養(yǎng)容器中，放置于恒溫培養(yǎng)箱中，28～32℃靜置培養(yǎng)；

通過分步調(diào)節(jié)培養(yǎng)液上方空氣整體氣壓以及氧氣分壓來實現(xiàn)細(xì)菌纖維素薄膜的上密下疏的雙層結(jié)構(gòu)；

a.細(xì)菌纖維素生長誘導(dǎo)期1～2天：控制與發(fā)酵培養(yǎng)液液面相接觸的空氣壓力為1個標(biāo)準(zhǔn)大氣壓，直至細(xì)菌將培養(yǎng)液中溶解的氧氣消耗殆盡后浮上液面，液面出現(xiàn)一層半透明的細(xì)菌纖維素薄膜；

b.細(xì)菌纖維素快速生長期2～3天：控制與細(xì)菌纖維素膜上表面空氣壓力為1個標(biāo)準(zhǔn)大氣壓，同時保持氧氣體積濃度在10～15%范圍內(nèi)；至細(xì)菌纖維素薄膜厚度達(dá)到0.5～1.5mm；

c.細(xì)菌纖維素平穩(wěn)生長期3～4天：

平穩(wěn)生長期分兩個階段：

疏松層形成階段，維持與細(xì)菌纖維素膜上表面相接觸的空氣壓力為1個標(biāo)準(zhǔn)大氣壓，同時維持氧氣濃度為10～15%，直至細(xì)菌纖維素薄膜厚度增長至3～5mm；

致密層形成階段，加壓使與細(xì)菌纖維素膜上表面相接觸的空氣壓力在1.1～1.5個標(biāo)準(zhǔn)大氣壓范圍內(nèi)，同時提高氧氣濃度至50～100%范圍內(nèi)；當(dāng)細(xì)菌纖維素膜厚度達(dá)到8～10mm時，將其取出，即得到具備疏密結(jié)構(gòu)的細(xì)菌纖維素薄膜；

4）后處理；

靜置培養(yǎng)結(jié)束后，將上述的具備疏密結(jié)構(gòu)的細(xì)菌纖維素薄膜浸泡至濃度為1～10wt%的氫氧化鈉溶液中，煮沸保持2～10小時，用純凈水清洗至pH為7.0，材料內(nèi)毒素<0.5EU/ml，再將處理后的細(xì)菌纖維素薄膜高壓滅菌并包裝低溫封存，即為具備疏密結(jié)構(gòu)的細(xì)菌纖維素皮膚修復(fù)材料。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種具備疏密結(jié)構(gòu)的細(xì)菌纖維素皮膚修復(fù)材料的制備方法，其特征在于，所述的高壓蒸汽滅菌后紫外輻照是指將所述發(fā)酵培養(yǎng)液置于高壓滅菌鍋內(nèi)121℃滅菌處理30分鐘后取出置于紫外燈下輻照冷卻至室溫。