[發(fā)明專利]采用多菌種降解多酚污染物的協(xié)同作用及研究方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210575473.5
• 申請日: 2012-12-25
• 公開（公告）號: CN103060419A
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 賈曉強;周征西;聞建平
• 申請（專利權(quán)）人: 天津大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02;C12R1/385;C12R1/01
• 代理公司: 天津市北洋有限責(zé)任專利代理事務(wù)所 12201
• 代理人: 王麗

1.一種采用多菌種降解多酚污染物協(xié)同作用的研究方法，其特征是將銅綠假單胞菌GIMT1.074、鞘氨醇桿菌CICC?23249或蒼白桿菌BJS2三種菌株單獨或兩種或三只混合成菌懸液，接種到含不同濃度的苯酚、間甲酚和4-氯酚的無機鹽培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，根據(jù)不同時間取出部分培養(yǎng)液，測量培養(yǎng)液中苯酚、間甲酚和4-氯酚的濃度，確定不同時刻的降解率，以及測量培養(yǎng)液中的細(xì)胞濃度考察不同細(xì)胞的生長情況。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所述的菌懸液分別為七組：

第一組：最終OD₆₀₀值為0.1的銅綠假單胞菌GIMT1.074；

第二組：最終OD₆₀₀值為0.1的鞘氨醇桿菌CICC?23249；

第三組：最終OD₆₀₀值為0.1的蒼白桿菌BJS2；

第四組：最終OD₆₀₀值分別為0.1的銅綠假單胞菌GIMT1.074和鞘氨醇桿菌CICC23249；

第五組：最終OD₆₀₀值分別為0.1的銅綠假單胞菌GIMT1.074和蒼白桿菌BJS2；

第六組：最終OD₆₀₀值分別為0.1的鞘氨醇桿菌CICC?23249以及蒼白桿菌BJS2；

第七組：最終OD₆₀₀值分別為0.1的銅綠假單胞菌GIMT1.074、鞘氨醇桿菌CICC?23249以及蒼白桿菌BJS2。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所述的無機鹽培養(yǎng)基的配方是：500mg(NH₄)₂SO₄，200mg?KH₂PO₄，100mg?MgSO₄，800mg?Na₂HPO₄·12H₂O，痕量元素母液10mL和1000mL?H₂O。

4.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征是所述痕量元素母液成分如下：0.4g?MnSO₄·4H₂O，0.4g?ZnSO₄·7H₂O，0.1g?Na₂MoO₄·2H₂O，0.1g?CuSO₄·5H₂O，1.0g?CaCl₂，10.0g?Na₂SO₄，2.0g?FeSO₄·7H2O，0.5mL?H₂SO₄，2.0g?NaOH，12.0g乙二胺四乙酸二鈉和H₂O?1000mL。

5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所述的培養(yǎng)條件是：將不同組的菌懸液分別接種到含初始苯酚濃度為200mg/L、初始4-氯酚濃度為100mg/L和初始間甲酚濃度為100mg/L的50mL無機鹽培養(yǎng)液的250mL三角瓶中；酚類滅菌經(jīng)過0.22μm膜過濾，其他試劑和培養(yǎng)基滅菌在115℃下進行30min；在30℃的恒溫下、200rpm的恒定轉(zhuǎn)速下的搖床中進行培養(yǎng)。

6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所述的培養(yǎng)液取出方式是：每隔6小時取出5mL的培養(yǎng)液，利用高效液相色譜儀分別測量剩余的苯酚、間甲酚和4-氯酚的濃度；同時測量培養(yǎng)液中的細(xì)胞濃度，測量方法是利用紫外分光光度計在吸收峰為600nm的條件下測量其OD₆₀₀的數(shù)值。

7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所述的確定培養(yǎng)液中苯酚、間甲酚和4-氯酚降解率所采用的計算公式是：

底物降解率（%）=（初始底物濃度-剩余底物濃度）/初始底物濃度×100%

8.采用多菌種降解多酚污染物的協(xié)同作用，其特征是協(xié)同作用如下：

（一）銅綠假單胞菌GIMT1.074具有快速降解苯酚、間甲酚和4-氯酚的能力，在23h內(nèi)可以將這三種酚類得混合物降解完全；

（二）鞘氨醇桿菌CICC?23249在28h內(nèi)可以將苯酚、4-氯酚和間甲酚三混合底物降解完全；

（三）蒼白桿菌BJS2降解緩慢，苯酚、4-氯酚和間甲酚三混合底物都未能完全降解；

（四）鞘氨醇桿菌CICC?23249不能降解4-氯酚以及4-氯酚的二元混合底物，但是對于含有這三種酚類的混合底物卻能高效降解，并且菌株的生長能力高于降解力最好的銅綠假單胞菌GIMT1.074，表明苯酚的存在對鞘氨醇桿菌CICC?23249降解4-氯酚以及4-氯酚的二元混合底物具有激活和促進的作用；

（五）蒼白桿菌BJS2能夠降解苯酚，但是不能降解4-氯酚以及4-氯酚的二元混合底物，而且發(fā)現(xiàn)蒼白桿菌BJS2對三種酚類得混合底物也不具有降解能力，說明了4-氯酚對蒼白桿菌BJS2具有極高的毒性，抑制了蒼白桿菌BJS2對苯酚和間甲酚的降解；

（六）三種酚類降解菌的協(xié)同降解作用發(fā)現(xiàn)混合菌對混合酚類污染物的降解能力比每一種單獨菌株的降解效率和效果都要好很多，銅綠假單胞菌GIMT1.074完全降解200mg/L苯酚、100mg/L間甲酚和100mg/L?4-氯酚所需時間為24小時，而以優(yōu)勢菌株銅綠假單胞菌GIMT1.074、鞘細(xì)菌、蒼白桿菌BJS2組成的菌群完全降解混合酚所需時間縮短為18小時，而且菌株的生物量也增加到原來最優(yōu)菌株——銅綠假單胞菌GIMT1.074的2倍。