[發明專利]含鼠lgG2b抗體Fc標簽的酵母表達載體及其構建方法

無效

• 申請號: 201210575163.3
• 申請日: 2012-12-26
• 公開（公告）號: CN103898152A
• 公開（公告）日: 2014-07-02
• 發明（設計）人: 萬曉春;王彩霞
• 申請（專利權）人: 深圳先進技術研究院
• 主分類號: C12N15/81
• 分類號: C12N15/81;C12N15/66;C12N15/13
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 吳平

1.一種含鼠lgG2b抗體Fc標簽的酵母表達載體，其特征在于，包括鼠lgG2b抗體Fc段基因與畢赤酵母表達載體pPICZαA，所述鼠lgG2b抗體Fc段基因連接在所述畢赤酵母表達載體pPICZαA的NotⅠ酶切位點和XbaⅠ酶切位點之間，其中，鼠lgG2b抗體Fc段基因的序列為SEQ?ID?NO.1。

2.一種含鼠lgG2b抗體Fc標簽的酵母表達載體的構建方法，其特征在于，包括如下步驟：

提取小鼠脾臟的總RNA，并反轉錄合成cDNA第一條鏈；

以所述cDNA第一條鏈為模板、序列為SEQ?ID?NO.2的DNA鏈作為上游引物及序列為SEQ?ID?NO.3的DNA鏈作為下游引物進行PCR擴增，得到PCR產物，其中，上游引物的序列中含有NotⅠ酶切位點，下游引物的序列中含有終止密碼子與XbaⅠ酶切位點；

分別用NotⅠ酶與XbaⅠ酶對畢赤酵母表達載體pPICZαA與PCR產物進行雙酶切反應，回收并純化得到含鼠lgG2b抗體Fc段基因的酶切產物及畢赤酵母表達載體pPICZαA的酶切產物；

采用DNA連接酶對回收并純化的兩種酶切產物進行連接，將連接產物轉化大腸桿菌DH5α，用Zeocin的LB平板篩選，挑選單菌落后提取質粒經酶切鑒定和測序鑒定后得到所述含鼠lgG2b抗體Fc標簽的酵母表達載體，其中，鼠lgG2b抗體Fc段基因連接在所述畢赤酵母表達載體pPICZαA的NotⅠ酶切位點和XbaⅠ酶切位點之間，鼠lgG2b抗體Fc段基因的序列為SEQ?ID?NO.1。