[發(fā)明專利]一種腎綜合征出血熱病毒IgM抗體檢測方法及試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210572577.0
• 申請日: 2012-12-24
• 公開（公告）號: CN103033616A
• 公開（公告）日: 2013-04-10
• 發(fā)明（設計）人: 楊致亭;楊金紅;王秀利;武新清;孫洪芝;劉迎軍;袁忠群;王德亞
• 申請（專利權）人: 濰坊市康華生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/532
• 代理公司: 濰坊正信專利事務所 37216
• 代理人: 王偉霞

1.一種腎綜合征出血熱病毒IgM抗體檢測方法，在膜上固定腎綜合征出血熱病毒抗原，加入待檢血清，待檢血清中的腎綜合征出血熱病毒IgM抗體和所述固定在膜上的抗原結(jié)合，再加入含有鼠抗人IgM單抗的金標工作液，鼠抗人IgM單抗與待檢血清中的腎綜合征出血熱病毒IgM抗體結(jié)合，顯示出紅色，最后加入洗滌液，洗去多余的金標工作液和其他雜質(zhì)，其特征在于：

所述金標工作液采用如下方法制得：

⑴制備金標濃縮液：取0.5～1wt%的氯金酸水溶液100ml，加熱至沸騰，加入0.4～0.8wt%檸檬酸三鈉溶液0.8～1ml，混勻，待溶液顏色由淡黃至藍色至紫色至完全透明的酒紅色，繼續(xù)煮沸5～15分鐘，停止加熱，冷卻至室溫，向得到的溶液中加入1mg/ml的鼠抗人IgM單抗0.2～0.5ml，然后將混合溶液進行離心處理，棄去上清液，得到下層金標濃縮液；

⑵制備稀釋液：將121.1～242.2mg的三羥甲基氨基甲烷、0.1～0.2mg的氯化鈉和0.5～0.7mg的牛血清白蛋白置于容量瓶內(nèi)，加入雙蒸水，使之完全溶解，然后繼續(xù)加入雙蒸水至100mL，再加入0.04～0.07wt%診斷試劑防腐劑PROCLIN300，然后依次加入1～2wt%海藻糖、2ml甘油、0.03～0.05wt%黃原膠與0.8～2.0wt%的羧甲基殼聚糖，再加入0.5ml水楊酸異辛酯一并混勻，最后用鹽酸將其pH調(diào)節(jié)至7.0～7.5，得到所述稀釋液；

⑶將所述金標濃縮液與稀釋液按1：15～30的體積比混合，得到金標工作液；

所述洗滌液，包括三羥甲基氨基甲烷、氯化鈉和牛血清白蛋白，并采用如下方法制得：將121.1mg～242.2mg的三羥甲基氨基甲烷、0.1mg～1mg的氯化鈉和0.1mg～1mg的牛血清白蛋白置于容量瓶內(nèi)，加入雙蒸水，使之完全溶解，然后繼續(xù)加入雙蒸水至100mL，加入0.1～0.2wt%的EDTA，然后再加入體積比為1.5～2.0%的丙醇，混勻后加入0.8～1.5wt%的二氯醋酸及0.2～0.4wt%的TritonX-100，最后再用氫氧化鈉溶液將其pH調(diào)節(jié)為8.5～9.0，得到洗滌液。

2.如權利要求1所述的一種腎綜合征出血熱病毒IgM抗體檢測方法，其特征在于：所述膜為硝酸纖維素膜。

3.如權利要求1所述的一種腎綜合征出血熱病毒IgM抗體檢測方法，其特征在于：所述稀釋液和洗滌液置于2～8℃下保存。

4.如權利要求1所述的一種腎綜合征出血熱病毒IgM抗體檢測方法，其特征在于：所述金標工作液由所述金標濃縮液與稀釋液按1：20的體積比混合得到。

5.一種腎綜合征出血熱病毒IgM抗體檢測試劑盒，其特征在于：包括檢測盒、按照權利要求1所述方法制備的金標工作液和洗滌液，所述檢測盒內(nèi)設有包被膜，所述包被膜上設有檢測點和質(zhì)控點，所述檢測點包被有固相腎綜合征出血熱抗原，所述質(zhì)控點包被有羊抗鼠抗體。

6.如權利要求5所述的一種腎綜合征出血熱病毒IgM抗體檢測試劑盒，其特征在于：所述腎綜合征出血熱抗原包被量為0.2mg/ml的腎綜合征出血熱抗原0.5μl，所述羊抗鼠抗體包被量為2mg/ml的羊抗鼠抗體0.5μl。

7.如權利要求5所述的一種腎綜合征出血熱病毒IgM抗體檢測試劑盒，其特征在于：所述包被膜為硝酸纖維素膜。

8.如權利要求5所述的一種腎綜合征出血熱病毒IgM抗體檢測試劑盒，其特征在于：所述檢測盒放置在濕度小于40%的環(huán)境下干燥2小時后，放置在鋁箔袋內(nèi)封口保存。