[發明專利]利用美洲大蠊培養蟲草菌的方法

有效

• 申請號: 201210572170.8
• 申請日: 2012-12-26
• 公開（公告）號: CN103897988A
• 公開（公告）日: 2014-07-02
• 發明（設計）人: 虞泓;郭瑞;陳自宏;曾文波;楊俊媛
• 申請（專利權）人: 云南云百草實驗室有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12R1/645;C12R1/79
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技術領域

本發明屬微生物技術領域，涉及利用美洲大蠊培養蟲草菌的方法。

背景技術

????美洲大蠊Periplaneta?americanaL.屬于昆蟲綱蜚蠊目蜚蠊科，俗稱“蟑螂”，是我國傳統的中藥材，其入藥始載于《神農本草經》，謂“治：血瘀，癥堅、寒熱、破積聚、喉咽痹”。《本草綱目》記載其主治“瘀血，癥堅，寒熱，下氣，利血脈”。美洲大蠊中含有大量的蛋白質、氨基酸、脂質、礦質元素和微量元素，具有較高的營養價值。美洲大蠊提取物具有很強的修復能力，可用于治療燒傷、燙傷、潰瘍等疾病，現代醫學研究表明美洲大蠊還具有抗癌、解毒、治療心血管疾病等功效。中國科學院昆明動物研究所研究表明，從美洲大蠊提取的氨基酸與粘多糖的化合物具有較強的抗艾滋病毒活性。此外，美洲大蠊繁殖快、易培養，具有十分重要的藥用價值及經濟價值，目前已作為康復新、心脈龍、肝龍等藥品的重要原料。

蟲草是蟲草真菌寄生在昆蟲上形成的復合體，蟲草的主要成分包括蟲草酸、腺苷、蟲草素、腺嘌呤等，蟲草屬中許多種類都是名貴的中藥材。冬蟲夏草具益精氣、補虛損、止咳化痰之功效，具有免疫調節、抗腫瘤、升白細胞、降血壓、抗衰老、抗疲勞、調節內分泌、抗病毒等多種藥理作用，長期以來被視為珍貴的滋補中藥。禪花的藥用已有1000多年的歷史，宋朝唐慎微所著《經史證類備急本草》中言“蟬花味甘寒，無毒，主小兒天吊，夜啼，心悸”。蛹蟲草含有蟲草素、腺苷、多糖、凝集素等活性物質，具有抗腫癌，抗炎，抗病毒，增強機體免疫力等功效。蝙蝠蛾被毛孢（Hirsutella?hepiali?Chen?et?Shen），蝙蝠蛾擬青霉（Paecilomyces?hepiali?Chen?et?Dai），蟬擬青霉（Paecilomyces?cicadae?(Miquel.)?Samson）和蛹草擬青霉（Paecilomyces?militaris?Liang）分別分離自冬蟲夏草，蟬花和蛹蟲草。人工培養的蟲草菌絲體不僅具有野生蟲草主要活性成分，并且能在短時間內獲得高于天然蟲草營養價值和藥用價值的蟲草培養物。

隨著人類掠奪式的采挖以及生態環境的破壞，導致蟲草產量逐年降低，價格漲幅較大，因此人工培育蟲草菌絲體用于替代天然蟲草成為趨勢。利用中藥材發酵培養蟲草菌，可使培養物兼具蟲草和中藥材的功效成分，如蔡海德發明的復方發酵蟲草菌粉黃芩苷組合藥物（中國發明專利?201110177641.0）。目前利用中藥材發酵培養蟲草菌，普遍使用植物藥材為原料，但植物藥材營養成分較為單一，需加入多種原料促進蟲草菌的生長，從而影響了蟲草菌對中藥材的發酵轉化。動物藥材含有較豐富的蟲草菌所需營養成分，無需加入過多原料，可使中藥材的發酵更加充分。本發明利用美洲大蠊豐富的營養成分培養蟲草菌，促進培養物藥用成分的積累。

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發明內容

????本發明提供了一種利用美洲大蠊培養蟲草菌的方法。

該方法的操作步驟如下：

（1）?生產菌株為蝙蝠蛾被毛孢（Hirsutella?hepiali?Chen?et?Shen），蝙蝠蛾擬青霉（Paecilomyces?hepiali?Chen?et?Dai），蟬擬青霉（Paecilomyces?cicadae?(Miquel.)?Samson），蛹草擬青霉（Paecilomyces?militaris?Liang）；

（2）?菌種制備：將蝙蝠蛾被毛孢菌株接種到PDA液體培養基，于18?℃恒溫培養50?d，待用；將蝙蝠蛾擬青霉，蟬擬青霉，蛹草擬青霉分別接種到PDA斜面培養基，于25?℃恒溫培養30?d，待用；

（3）?固體培養基的制備：固體培養基的配方為：美洲大蠊20?g，蔗糖2?g，水60?ml，混勻裝入300?ml三角瓶中，121?℃高壓滅菌30?min；

（4）?固體培養：將步驟（2）中制備好的菌種分別按2?ml/瓶的量接入步驟（3）三角瓶固體培養基中，于18-25?℃靜置培養20-50?d，取出培養物；相同條件下，不接菌的培養基為空白對照；

（5）?培養物后處理：將步驟（4）中培養好的固體培養物50?℃恒溫烘干，然后粉碎至80?目粉末；檢測蟲草酸、腺苷、2′-脫氧腺苷、3′-脫氧腺苷、尿嘧啶、腺嘌呤和蛋白質的含量。

本發明的關鍵點在于：充分利用美洲大蠊豐富的營養成分培養蟲草菌，調整溫度、時間等培養條件，以上關鍵點如能把握好，可以顯著提高發酵物的主要藥用成分含量。