[發明專利]一種流行性出血熱病毒IgM抗體酶聯免疫檢測試劑盒及其制備和使用方法

有效

• 申請號: 201210572128.6
• 申請日: 2012-12-24
• 公開（公告）號: CN103063841A
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發明（設計）人: 楊致亭;楊愛香;王春光;沈孝功;劉發新;劉海波;邱香廷;宋玉翠
• 申請（專利權）人: 濰坊市康華生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/531
• 代理公司: 濰坊正信專利事務所 37216
• 代理人: 王偉霞

技術領域

本發明涉及生物學檢測技術領域，具體涉及一種流行性出血熱病毒IgM抗體酶聯免疫檢測試劑盒及其制備和使用方法。

背景技術

流行性出血熱（EHF）又稱腎綜合征出血熱（hemorrhagic?fever?with?renal?syndrome,HFRS），是由布尼亞病毒科（Bunyaviridae）漢坦病毒屬（Hantavirus）中某些病毒引起，并以鼠類為主要傳染源的自然疫源性疾病。臨床上以發熱、休克、充血性出血和急性腎功能衰竭為主要表現，并常伴有腔道出血、中樞神經系統并發癥、肺水腫等多種并發癥。腎綜合征出血熱分布于全世界30多個國家，疫源地分布于五大洲70多個國家，已成為世界公共衛生問題。我國是受腎綜合征出血熱危害最為嚴重的國家，年報告發病人數約為4～6萬，占世界報告病例總數的90%以上，高發疫區發病率在50/10萬左右，偶有暴發流行，病死率高達30%。該病在我國分布范圍廣、疫區類型復雜，是我國最嚴重的蟲媒傳染病之一。

漢坦病毒為分節段的負鏈RNA病毒，其基因組由大（L）、中（M）和小（S）三個RNA片段組成，分別編碼依賴RNA的RNA多聚酶、包膜糖蛋白（G1和G2）和核殼體蛋白。漢坦病毒基因組RNA的5’端和3’端的15～30個堿基互補，這些互補序列可以保持RNA的穩定性，并可能在轉錄或復制的過程中被RNA聚合酶識別，啟動合成新的RNA。11個堿基的最末端序列“TAGTAGTAGAC”為所有漢坦病毒所共有，是漢坦病毒的重要基因特征之一，是區分漢坦病毒和布尼亞病毒科其它病毒的重要依據。漢坦屬病毒和布尼亞病毒科其它病毒在血清學上沒有交叉反應。

目前流行性出血熱病毒抗體傳統的檢測方法是采用血清學診斷方法，包括間接酶免吸附試驗檢測EHF?IgG抗體、膠體金法、免疫熒光試驗檢測雙份血清IgG抗體等，這些方法均在一定程度上易出現假陽性或假陰性現象，給流行性出血熱的臨床診斷帶來一定干擾。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是：提供一種流行性出血熱病毒IgM抗體酶聯免疫檢測試劑盒及其制備和使用方法，使之具有以下優點：一、應用IgM捕獲ELISA法檢測EHF?IgM抗體，以減少假陽性或假陰性現象對臨床診斷帶來的干擾，并且使該試劑盒能夠對流行性出血熱進行快速、準確的檢測，同時誤差小、檢測靈敏度高、對檢測設備要求低；二、提高試劑盒的使用安全性；三、提高反應板條的使用期限。

為解決上述技術問題，本發明的技術方案是：

一種流行性出血熱病毒IgM抗體酶聯免疫檢測試劑盒，包括盒體，其特征在于：所述盒體內設有EHF酶標板、封板膜、EHF酶結合物溶液瓶、底物A溶液瓶、底物B溶液瓶、EHF陰性對照溶液瓶、EHF陽性對照溶液瓶和終止液溶液瓶；

所述EHF酶標板上設有五個以上包被有固相抗人IgM單克隆抗體的透明反應孔；

每1000ml所述底物A溶液內含有檸檬酸三鈉4.16g～6.24g、檸檬酸7.76g～11.64g、乙酸鈉7.13g～10.70g、冰乙酸1.52ml～2.28ml、雙氧水0.8ml～1.2ml；

每1000ml所述底物B溶液內含有無水乙醇520ml～780ml、乙二醇272ml～408ml、二甲基甲酰胺8ml～12ml、3，3'，5，5'-四甲基聯苯胺0.8g～1.2g；

每1000ml所述EHF陰性對照溶液內含有氯化鈉6g～8g、Na₂HPO₄·12H₂O2.2g～3.4g、KH₂PO₄0.16g～0.24g、氯化鉀0.16g～0.24g、蔗糖40g～60g、疊氮化鈉0.08g～0.12g；

所述EHF陽性對照溶液是在每1ml所述EHF陰性對照溶液中加入24μg～36μg羊抗兔抗體配置而成；

所述終止液是在900ml純水中加入80ml～120ml硫酸配置而成的。

優選的，所述EHF酶標板上設有5~95個反應孔。

優選的，所述EHF酶標板包括板架和多個可拆卸安裝在所述板架上的反應板條，所述反應孔設置在所述反應板條上。

優選的，所述盒體內部設有隔斷，使所述盒體內部具有多個空腔。

優選的，所述盒體內部設有一個橫向隔斷，使所述盒體分成一個上部用于容納所述EHF酶結合物溶液瓶、底物A溶液瓶、底物B溶液瓶、EHF陰性對照溶液瓶、EHF陽性對照溶液瓶和終止液溶液瓶的空腔和一個底部用于容納所述EHF酶標板的空腔。