[發明專利]抗中華鱉IL-1β多克隆抗體的制備及在檢測中的應用

無效

• 申請號: 201210571022.4
• 申請日: 2012-12-24
• 公開（公告）號: CN103059136A
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發明（設計）人: 李肖梁;方維煥;梁權
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C07K16/24
• 分類號: C07K16/24;C07K16/06;G01N33/68
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 周世駿

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及兔抗中華鱉IL-1beta?(Chinese?soft-shelled?turtle?interleukin-1?beta，tIL-1β)多克隆抗體的制備，及其在以間接免疫熒光檢測(IFA)方法、western-blotting和ELISA檢測中華鱉IL-1β含量的應用。

背景技術

中華鱉屬脊索動物門、脊索動物亞門、爬行綱、無孔亞綱、龜鱉目、曲頸龜亞目、鱉科(Trionychidae)。龜鱉類動物作為古老的水生爬行動物，古生代晚期就已經出現，具有?2億年的進化史，然而其形態結構保持的相對穩定性和對環境具有極強的適應能力，提示其機體內可能存在某些特殊的物質或結構，因此，具有重要的科學研究價值。同時，由于鱉類具有較高的營養、滋補價值，導致近年來人工規模化養殖快速擴張，對其病害的預防和控制也引起了廣泛的關注。因此，開展中華鱉免疫機制的研究有助于我們從比較發育免疫學的角度認識機體免疫系統的進化，也有助于我們通過免疫學方法和手段進行動物的病害控制。

IL-1家族包括IL-1α，IL-1β，IL-1Ra?(IL-1?receptor?antagonist)，IL-18，IL-33?及IL-1F5至IL-1F10，其中IL-1α、IL-1β、IL-18和IL-1Ra等四個成員發現較早，人們對進行了廣泛而深入的研究。IL-1β參與機體的局部和全身炎癥反應，也在機體的免疫損傷機制中起著主要的調節作用，是一個非常重要的促炎細胞因子。研究表明，它能誘導其它炎癥細胞因子(如IL-4，IL-6等)、趨化因子、粘附分子、急性期反應蛋白(Acute?phase?response?protein，?APR)等的合成，有利于機體抵抗入侵的病原微生物等。IL-1β可以刺激滑膜細胞、軟骨細胞、成纖維細胞分泌大量PGE2、膠原酶和中性蛋白酶等，從而使關節中的膠原組織降解、骨質吸收、局部血管通透性增加，直接參與關節的病理損傷。近年來發現多種腫瘤與IL-1β的表達存在一定的相關性，由于IL-1β能協同IL-2、IFN-γ誘導CTL和NK細胞的殺傷活性，促進殺傷細胞IL-2受體的表達以及成纖維細胞分泌IL-6，因此具有抗腫瘤作用。研究還發現IL-1β能降低血糖水平，也與COX-2的表達存在相關性。盡管，IL-1β在參與機體的免疫防御反應中起到了積極作用，但是，IL-1β是也介導‘‘auto-inflammatory’’的主要細胞因子，尤其對一些慢性疾病發生發展起到了推波助瀾作用，如心肌梗塞或中風等缺血性損傷、動脈粥樣硬化、2型糖尿病、關節炎和冒煙型多發性骨髓瘤等均與其多度激活不無關系。研究表明，機體通過給予IL-1受體拮抗物（interleukin?1?receptor?antagonist，IL-1ra)、IL-1單克隆抗體等減少IL-1β數量，從而有效地緩解或減輕急性和慢性非感染性炎癥的發生發展。因此，IL-1β的加工成熟分泌必須被精確的控制。人類IL-1β生物學活性的多樣性為我們對中華鱉IL-1β免疫機能的研究和病害的免疫干預預提供有益的借鑒，但由于缺乏有效的材料，如抗體等，使得我們對其的研究不能深入。

本發明旨在建立兔抗tIL-1β多克隆抗體的制備方法及基于該多抗的間接免疫熒光檢測(IFA)方法、western-blotting檢測方法和ELISA檢測方法。

發明內容

本發明要解決的技術問題是，提供一種兔抗中華鱉IL-1beta?(Chinese?soft-shelled?turtle?interleukin-1?beta，tIL-1β)多克隆抗體的制備方法，并進一步提供了基于該多抗的tIL-1β間接免疫熒光檢測(IFA)方法、western-blotting檢測方法和ELISA檢測方法。

為解決技術問題，本發明提供的解決技術方案為：

提供一種兔抗中華鱉IL-1beta(Chinese?soft-shelled?turtle?interleukin-1?beta，tIL-1β)多克隆抗體的制備方法，包括步驟：

(1)抗原(tIL-1β)制備