[發明專利]一種口腔粘膜滲出液快速檢測方法

無效

• 申請號: 201210569847.2
• 申請日: 2012-12-25
• 公開（公告）號: CN103033613A
• 公開（公告）日: 2013-04-10
• 發明（設計）人: 劉滿江
• 申請（專利權）人: 北京瑪諾生物制藥有限公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558
• 代理公司: 北京市商泰律師事務所 11255
• 代理人: 陳祖雄

技術領域

本發明涉及一種口腔粘膜滲出液快速檢測方法，屬于生物技術領域。

背景技術

人們已經開發了許多定性或定量檢測生物體組織和流體中各種分析物的分析方法。如一種診斷口腔疾病的試劑，選用孟加拉紅為染色劑，其與腫瘤細胞DNA多聚酶有親和力，其著色對口腔癌的診斷有特異性，其著色深淺度能鑒別口腔癌和癌前損害，制備出孟加拉紅口腔癌診斷試劑由以下原料構成：碳酸氫鈉、甲醛或乙醇、孟加拉紅、蒸餾水，均按一定比例配制。

一種人唾液中變形鏈球菌和茸毛鏈球菌的檢測方法，首先是設計引物，所提供的套式聚合酶鏈式反應包括二次PCR，4對引物，變形鏈球菌兩對正反引物和茸毛鏈球菌兩對正反引物；其次是細菌染色體DNA及唾液染色體DNA提取；第三是第一次PCR，依次加入兩對引物，四種dNTP混合物及模板DNA和Taq酶；第四是第二次PCR，將第一次PCR產物稀釋，加入另外兩對引物，進行擴增；第五是電泳。

收集口腔唾液用于檢測帶來相對較少的隱私侵犯，其相對安全，并可相對容易地快速完成。

盡管通過上述檢測試條的分析法具有直接、快速且不需要復雜步驟的優點，但對于檢測對象而言，在整個檢測過程中都要咬合檢測試條是不方便的。

發明內容

本發明的目的是提供一種口腔粘膜滲出液快速檢測方法，一種簡單、方便且有成本效益的用側向免疫層析試條的口腔粘膜滲出液收集方法，其適于靈敏和快速地檢測口腔粘膜滲出液中分析物。

一種口腔粘膜滲出液快速檢測方法，含有以下步驟；

首先，通過輕輕地倒轉瓶子約3次來混合樣品緩沖液（以pH7.2+/-0.2磷酸鉀緩沖的0.15M氯化鈉、0.l%?Triton?X-100、15%熱滅活雞血清、30μg/ml親合素、0.2%?Tween?80、0.2%?Tetronic?T-904和0.0285%（活性成分）ProClin?950）；

從瓶子取下瓶蓋并將緩沖液充填到滴管中至刻線；

將滴管的口腔粘膜滲出液分配至試管中；然后取下一支由包所提供的潔凈拭子；

抓住拭子手柄，避免觸及拭子的織物端；

隨后，施加適當壓力并輕柔地以拭子織物端來回地擦拭上齒齦線。在口的一角開始輕柔而緩慢地擦拭直至到達口的另一角，然后沿上齒齦線擦拭返回出發點，時間為5-6秒；

然后轉動拭子以使用拭子的另一側擦拭下齒齦；

使用拭子的另一側輕柔而緩慢地來回擦拭下齒齦線；

在口的一角開始，在口的另一角結束，然后沿下齒齦線擦拭返回出發處，時間為5-6秒；

立即將拭予放于盛有樣品緩沖液的管中；

緊握拭子手柄，將拭子往復插入樣品緩沖液管中6-8次，靠住管壁摩擦拭子的兩側；從管中取出拭子；

口腔粘膜滲出液現在已準備好用于檢測；

轉移200μl此口腔粘膜滲出液到空試管；

將使用以下的測定試條檢測此試樣；

如果要對口腔粘膜滲出液進行多于一個檢測試條的檢測，可將多個200μl試樣轉移到單個空試管；

打開裝有測定試條的罐；從罐中取出一個測定試條并立刻重新蓋好罐；

避免用手觸及試條中央的膜表面；

將測定試條置于含有200μl稀釋標本的管中，使測定試條上的箭頭指向下；

將計時器設定為20分鐘，或記錄將測定試條加至樣品的時間；

20分鐘以后讀取檢測結果；

然后將試條、管和拭子棄于生物危險品廢物容器中。

本發明的優點是可容易地快速用于許多病癥的診斷，這些病癥需要對唾液中的分析物進行免疫檢測，特別容易使用本發明的概念用于性傳播疾病檢測，比如丙肝抗體和乙肝抗體。

具體實施方式

顯然，本領域技術人員基于本發明的宗旨所做的許多修改和變化屬于本發明的保護范圍。

實施例1：

使用本領域技術人員所知的方法，適用于本發明的測定試條可從任何來源包括天然，化學合成或重組生產而獲得。例如，優選的SEQ?ID?No.1至5的肽部分可使用固相肽合成技術化學合成，或通過可操作性將編碼期望肽的核酸連接到表達栽體中并在合適宿主中表達所述核酸而進行重組生產。一旦分離，可使用已知技術將所述肽生物素化。

可使用任何本領域技術人員所知的方法將合適的抗原固定到基質，所述方法不破壞抗原對靶抗體的特異性結合。

對于吸水性基質，使用本領域技術人員公知的技術，通常在封閉之前將復合物的鏈親合素偶聯到基質。