[發明專利]細胞凍存液及細胞凍存方法

無效

• 申請號: 201210568487.4
• 申請日: 2012-12-24
• 公開（公告）號: CN103891709A
• 公開（公告）日: 2014-07-02
• 發明（設計）人: 萬曉春;陳鳳蓮;趙琦;李紅昌
• 申請（專利權）人: 深圳先進技術研究院
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 吳平

技術領域

本發明涉及細胞凍存技術，特別是涉及一種細胞凍存液及細胞凍存方法。

背景技術

細胞凍存及復蘇是細胞培養技術中的重要技術之一，細胞凍存是保存培養細胞的一種方法。細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融，這樣可以最大限度的保存細胞活力。

細胞凍存液是細胞凍存時必須使用的一種溶液，其作用是將需要凍存的細胞懸浮于凍存液，供給細胞生命代謝所必須的營養物質，同時可以防止或減少冷凍冰晶對細胞的損傷作用。為了為細胞提供足夠的營養，保持細胞的存活率，現有的細胞凍存液一般加入較多的血清作為細胞生長的營養物質，血清占細胞凍存液的體積一般從20%~90%不等，不僅價格昂貴，還易導致污染風險較高。

發明內容

基于此，有必要提供一種提高細胞存活率，且污染風險較低的細胞凍存液。

進一步，提供一種細胞凍存方法。

一種細胞凍存液，按體積百分數包括以下組分：

全細胞培養液?????90~95%；

二甲基亞砜???????5~10%；

其中，所述全細胞培養液包括體積比為9:1的細胞培養基和胎牛血清。

在其中一個實施例中，按體積百分數包括以下組分：

全細胞培養液?????90%；

二甲基亞砜???????10%；

其中，所述全細胞培養液包括體積比為9:1的細胞培養基和胎牛血清。

在其中一個實施例中，所述細胞培養基包括下述組分：

無水氯化鈣265.00mg/L；硝酸鐵0.10mg/L；氯化鉀400.00mg/L；無水硫酸鎂97.67mg/L；氯化鈉6400.00mg/L；無水磷酸二氫鈉109.00mg/L；丁二酸75.00mg/L；丁二酸鈉100.00mg/L；L-鹽酸精氨酸84.00mg/L；L-鹽酸胱氨酸63.00mg/L；甘氨酸30.00mg/L；L-鹽酸組氨酸42.00mg/L；L-異亮氨酸105.00mg/L；L-亮氨酸105.00mg/L；L-鹽酸賴氨酸146.00mg/L；L-甲硫氨酸30.00mg/L；L-苯丙氨酸66.00mg/L；L-絲氨酸42.00mg/L；L-蘇氨酸95.00mg/L；L-色氨酸16.00mg/L；L-酪氨酸72.00mg/L；L-纈氨酸94.00mg/L；D-泛酸鈣4.00mg/L；酒石酸膽堿7.20mg/L；葉酸mg/L；肌醇7.20mg/L；煙酰胺4.00mg/L；核黃素0.40mg/L；鹽酸硫胺4.00mg/L；鹽酸吡哆辛4.00mg/L；葡萄糖1000.00mg/L；丙酮酸鈉110.00mg/L及酚紅9.30mg/L。

在其中一個實施例中，所述細胞培養基包括下述組分：

氯化鈣116.6mg/L；硫酸銅0.0013mg/L；九水合硝酸鐵0.05mg/L；七水合硫酸亞鐵0.417mg/L；氯化鉀311.8mg/L；氯化鎂28.64mg/L；無水硫酸鎂48.84mg/L；氯化鈉6999.6mg/L；無水磷酸二氫鈉54.35mg/L；無水磷酸氫二鈉71.02mg/L；七水合硫酸鋅0.432mg/L；L-鹽酸精氨酸147.5mg/L；L-胱氨酸鹽酸鹽31.29mg/L；L-谷氨酰胺365mg/L；甘氨酸18.75mg/L；L-鹽酸組氨酸31.48mg/L；L-異亮氨酸54.47mg/L；L-亮氨酸59.05mg/L；L-鹽酸賴氨酸91.25mg/L；L-甲硫氨酸17.24mg/L；L-苯丙氨酸35.48mg/L；L-絲氨酸26.25mg/L；L-蘇氨酸53.45mg/L；L-丙氨酸4.45mg/L；L-門冬酰胺7.5mg/L；L-門冬氨酸6.65mg/L；L-鹽酸半胱氨酸17.56mg/L；L-谷氨酸7.35mg/L；L-脯氨酸17.25mg/L；L-色氨酸9.02mg/L；L-酪氨酸mg/L；L-纈氨酸52.85mg/L；無水葡萄糖3151mg/L；次黃嘌呤2mg/L；亞油酸0.042mg/L；硫辛酸0.105mg/L；酚紅8.1mg/L；1,4-丁二胺二鹽酸鹽0.081mg/L；丙酮酸鈉55mg/L；維生素H0.0035mg/L；D-泛酸鈣2.24mg/L；氯化膽堿8.98mg/L；葉酸2.65mg/L；肌醇12.6mgL；煙酰胺2.02mg/L；鹽酸吡哆醛2mg/L；鹽酸吡哆醇0.03mgL；核黃素0.219mg/L；鹽酸硫胺2.17mg/L；胸苷0.365mg/L及維生素B₁₂0.68mg/L。

在其中一個實施例中，所述細胞培養基包括下述組分：