[發明專利]P450sca-2酶突變體、其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201210566984.0
• 申請日: 2012-12-24
• 公開（公告）號: CN103898071A
• 公開（公告）日: 2014-07-02
• 發明（設計）人: 林章凜;巴麗娜;李盼;張暉;段妍
• 申請（專利權）人: 清華大學
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12N15/53;C12N15/63;C12N1/21;C12N1/19;C12P7/62
• 代理公司: 北京永新同創知識產權代理有限公司 11376
• 代理人: 程大軍

1.一種分離的多肽，其是SEQ?ID?NO:1所示的P450sca-2酶的變體或所述變體的生物學活性片段，

其中所述多肽在對應于SEQ?ID?NO:1所示序列中的G52、F89、P159、D269、T323和E370位置上包括氨基酸取代，而且

相對于SEQ?ID?NO:1所示的P450sca-2酶，所述多肽在宿主細胞中表達時賦予所述宿主細胞提高的在含十氫萘環化合物的十氫萘環的6β位引入羥基的能力。

2.權利要求1的分離的多肽，其中所述氨基酸取代為G52S、F89I、P159A、D269E、T323A和E370V，且所述多肽包括SEQ?ID?NO:2所示的序列。

3.權利要求1或2的分離的多肽，其中所述多肽的氨基酸序列進一步包括在對應于SEQ?ID?NO:1所示序列中的選自T119、N363、T85、V194和它們任意組合的位置上的氨基酸取代。

4.權利要求3的分離的多肽，其中所述N363位置的氨基酸取代為N363Y或N363H；所述T119位置的氨基酸取代為T119S、T119C或T119N；所述V194位置的氨基酸取代為V194C、V194N或V194T；且所述T85位置的氨基酸取代為非極性疏水氨基酸。

5.權利要求4的分離的多肽，其中所述T85位置的氨基酸取代為T85M、T85L、T85F或T85I。

6.權利要求3的分離的多肽，其中所述氨基酸取代為T119N、N363Y、T85I和T194T。

7.權利要求3的分離的多肽，其中所述氨基酸取代為T119S、N363Y、T85F和T194N。

8.一種分離的多肽，其包含選自以下的氨基酸序列或由選自以下的氨基酸序列組成：

i)SEQ?ID?NO:2、SEQ?ID?NO:3、SEQ?ID?NO:4、SEQ?ID?NO:5、SEQ?IDNO:6、SEQ?ID?NO:7、SEQ?ID?NO:8、SEQ?ID?NO:9、SEQ?ID?NO:10、SEQ?IDNO:11、SEQ?ID?NO:12、SEQ?ID?NO:13、SEQ?ID?NO:14、SEQ?ID?NO:15或SEQ?ID?NO:16；

ii)與SEQ?ID?NO:2、SEQ?ID?NO:3、SEQ?ID?NO:4、SEQ?ID?NO:5、SEQID?NO:6、SEQ?ID?NO:7、SEQ?ID?NO:8、SEQ?ID?NO:9、SEQ?ID?NO:10、SEQID?NO:11、SEQ?ID?NO:12、SEQ?ID?NO:13、SEQ?ID?NO:14、SEQ?ID?NO:15或SEQ?ID?NO:16所示的氨基酸序列具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的序列相同性的氨基酸序列；或

iii)與SEQ?ID?NO:2、SEQ?ID?NO:3、SEQ?ID?NO:4、SEQ?ID?NO:5、SEQID?NO:6、SEQ?ID?NO:7、SEQ?ID?NO:8、SEQ?ID?NO:9、SEQ?ID?NO:10、SEQID?NO:11、SEQ?ID?NO:12、SEQ?ID?NO:13、SEQ?ID?NO:14、SEQ?ID?NO:15或SEQ?ID?NO:16所示的氨基酸序列相比經過取代、缺失或添加一個或幾個氨基酸的氨基酸序列；而且

所述多肽在宿主細胞中表達時賦予所述宿主細胞提高的在含十氫萘環化合物的十氫萘環的6β位引入羥基的能力。

9.權利要求1或8所述的分離的多肽，所述含十氫萘環的化合物為他汀類藥物，優選美伐他汀。

10.權利要求1或8所述的分離的多肽，所述宿主細胞是原核微生物，所述原核微生物優選自以下組中：大腸桿菌(Escherichia?coli)、枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)、自養假諾卡氏菌(Pseudonocardia?autotrophica)、小四孢菌(Microtetraspora)和嗜碳鏈霉菌(Streptomyces?carbophilus)。

11.一種分離的多核苷酸，其包含編碼權利要求1-10之一所述的分離的多肽的核苷酸序列。