[發(fā)明專利]EF4蛋白編碼基因沉默在癌癥治療方面的應用有效

申請?zhí)枺?/td>	201210566942.7	申請日：	2012-12-24
公開（公告）號：	CN103877594A	公開（公告）日：	2014-06-25
發(fā)明（設計）人：	秦燕;郝佳;朱萍	申請（專利權）人：	中國科學院生物物理研究所
主分類號：	A61K48/00	分類號：	A61K48/00;A61P35/00
代理公司：	中科專利商標代理有限責任公司 11021	代理人：	王旭
地址：	100101***	國省代碼：	北京;11
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摘要：
搜索關鍵詞：	ef4 蛋白編碼基因沉默癌癥治療方面應用
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【說明書】：

技術領域

本發(fā)明涉及基因沉默在癌癥治療中的應用。具體地，本發(fā)明提供使人癌細胞中的EF4蛋白編碼基因沉默的試劑在制備用于抑制所述癌細胞生長的藥物中的用途，更具體地，本發(fā)明提供針對人EF4蛋白編碼基因的siRNA干擾片段在制備用于抑制人癌細胞生長的藥物中的用途。

背景技術

線粒體是由古生菌進化而來的，擁有自己的DNA、RNA和蛋白合成系統(tǒng)。線粒體DNA可以編碼2種rRNA、22種tRNA、8-13種呼吸鏈復合物亞基蛋白。在人類的線粒體中，線粒體DNA編碼13種線粒體蛋白，7種(ND1-4、ND4L、ND5和ND6)蛋白是呼吸鏈復合物I上的亞基；一種(細胞色素b)是復合物III上的亞基；3種(CoxI，CoxII，CoxIII)是復合物IV上的亞基；兩種(ATP6和ATP8)是復合物V上的亞基。

呼吸鏈復合物I、III、IV、V的組裝要求細胞核DNA(nDNA)和線粒體DNA(mtDNA)的協(xié)同表達。每一個呼吸鏈復合物上大部分亞基均由nDNA編碼，蛋白經(jīng)過翻譯后修飾，成熟，轉位過程進入線粒體。線粒體翻譯機器55S系統(tǒng)和原核生物翻譯系統(tǒng)70S類似，但是它具有自己的特點：(1)翻譯調節(jié)機制相對簡單，合成速率是細胞質的10-20倍；(2)翻譯出錯率較高。55S核糖體翻譯的產物邊翻譯邊組裝，導致復合物亞基具有更低的翻譯保真性。于是我們便提出了這樣的疑問：55S翻譯機器如何維持足夠高的翻譯保真性從而與細胞質80S系統(tǒng)相匹配？

線粒體呼吸鏈復合物I、III、IV可以進一步組裝成超級復合物(RCS)，RCS的結構有利于電子的跨膜傳遞，提高ATP合成效率。在人類細胞中，RCS的組裝是保證正常呼吸的一個必要的步驟。RCS組裝缺陷可能導致呼吸障礙。但是RCS組裝的分子機制目前研究的并不是太透徹。

EF4蛋白是所有已知的基因組中最保守的蛋白，在原核生物中，它可以與正在進行蛋白延伸過程中的核糖體結合引發(fā)tRNA的反向轉位。同時，研究發(fā)現(xiàn)EF4還具有GTP水解酶活性和分子伴侶活性，降低了蛋白翻譯的出錯率。在酵母中的研究發(fā)現(xiàn)EF4在應激條件下能夠影響線粒體的蛋白合成，但是在人源化細胞中對EF4功能的研究還未見報道。

由上可知，EF4蛋白在人類細胞中具有高度保守的同源物，其亞細胞定位應該在細胞的能量工廠——線粒體中，對人類正常細胞和癌癥細胞的代謝具有重要作用，為人類的癌癥、代謝疾病的診斷和治療提供了潛在的生物標記物和靶位點，并為相關藥物的設計提供了線索。

發(fā)明內容

我們首次發(fā)現(xiàn)在人類癌癥細胞中EF4蛋白對線粒體功能具有重要的調控作用。EF4蛋白編碼基因的沉默可以有效地抑制人癌癥細胞的生長。

更具體地，本發(fā)明提供以下各項：

1.使人細胞中的EF4蛋白編碼基因沉默的試劑在制備用于抑制所述細胞生長的藥物中的用途。

2.根據(jù)1所述的用途，其中所述EF4蛋白編碼基因的序列如SEQ?IDNo.1所示。

3.根據(jù)1或2所述的用途，其中所述使人細胞中的EF4蛋白編碼基因沉默的試劑包含針對所述EF4蛋白編碼基因的siRNA干擾片段。

4.根據(jù)3所述的用途，其中所述siRNA干擾片段是混合物，所述混合物包含序列分別如SEQ?ID?No.2、SEQ?ID?No.3和SEQ?ID?No.4所示的三種siRNA干擾片段。

5.根據(jù)4所述的用途，其中所述三種siRNA干擾片段的混合比例為1∶1∶1。

6.根據(jù)1或2所述的用途，其中所述人細胞是人癌癥細胞。

7.根據(jù)6所述的用途，其中所述人癌癥細胞是人宮頸癌細胞系Hela細胞或人肺癌細胞系H1299細胞。

下面結合具體實施例對本發(fā)明作進一步說明。