[發明專利]一種乳制品中葉酸含量的檢測方法

有效

• 申請號: 201210566051.1
• 申請日: 2012-12-24
• 公開（公告）號: CN103063768A
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發明（設計）人: 石丹;劉彪
• 申請（專利權）人: 內蒙古伊利實業集團股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京三友知識產權代理有限公司 11127
• 代理人: 韓蕾

技術領域

本發明是關于一種乳制品中葉酸含量的檢測方法。

背景技術

葉酸(folic?acid，FA)為蝶呤衍生物，亦稱喋酰谷氨酸，是機體細胞生長和繁殖的必須物質，其分子式為C₁₉H₁₉N₇O₆，分子量為441.40。葉酸主要用于各種原因引起的葉酸缺乏以及葉酸缺乏引起的巨幼紅細胞性貧血的治療，惡性貧血的輔助治療，以及妊娠期、哺乳期婦女的預防給藥；葉酸還對人體的神經健康有重要作用，它可提供大量游離碳原子，是制造神經末梢和構成傳遞神經沖動的重要化學物質的原料。

由于葉酸具有特殊的生理功能，特別是對妊娠期、哺乳期婦女和胎兒，葉酸經常作為營養強化劑用于保健食品及配方食品中，因此，如何測定這些食品中的葉酸含量，以監控這些食品的質量就變得尤為重要。

文獻“高效液相色譜法測定葉酸片中葉酸的含量”(高桂花等人，《濟寧醫學院學報》，2010年04期)公布了一種測定葉酸的方法，但該方法主要應用于葉酸含量大于50％的葉酸片劑中，色譜峰中干擾物質很少，用普通的紫外色譜方法就可以直接進行測定，而對于干擾物質較多，葉酸含量較少的食品就很難通過這種方法進行定量。

CN102175878A公開了一種酶聯免疫法測定食品、飼料和維生素產品的方法，但酶聯免疫法長期使用成本較高，不利于生產企業節約成本。

文獻“高效液相色譜-柱后衍生法測定乳粉中的葉酸含量”(關曉書等人，《民營科技》，2010年11期)和“固相萃取-反相高效液相色譜法檢測嬰幼兒配方乳粉中葉酸的含量”(包怡紅等人，《營養學報》，2009年3期)分別公布了利用柱前和柱后衍生的方法測定乳粉中葉酸的含量，但兩種方法中使用的衍生劑過二硫酸鉀和高錳酸鉀具有很強的氧化性，容易腐蝕高效液相色譜儀器的管路，長期測定容易造成設備的損壞。

文獻“熒光粉光光度法測定食品中葉酸的含量”(黃宏南等人，《中國衛生檢驗雜志》，2002年01期)公布了一種采用反相高效液相色譜熒光法測定保健食品中的葉酸含量的方法，其中主要是利用高錳酸鉀氧化衍生葉酸，并通過過氧化氫滴定過量的高錳酸鉀，再用熒光光度計測定葉酸含量。該方法使用了兩種氧化劑共同作用過程繁瑣，此方法的回收了僅為75％，回收率不在規定的80％～120％之間，不能作為一種成熟的方法應用于實際檢測。

針對現有技術中存在的問題，本發明利用含有C18填料的固相萃取技術進行除雜，再使用反相高效液相色譜經過過氧化氫衍生后檢測乳粉中葉酸的含量，本發明衍生過程中稍過量的過氧化氫在加熱時分解，不會帶入檢測設備中，因此可以防止設備長期使用過程中發生管路氧化。本方法具有操作簡單、方法靈敏度高、選擇性好、回收率高、重現性好等特點，并且該方法主要適用于基質復雜、葉酸添加量少的乳粉中。

發明內容

本發明的目的在于提供一種乳制品中葉酸含量的檢測方法。本發明方法具有很高的靈敏度、精密度和準確度。

為達上述目的，本發明提供了一種乳制品中葉酸含量的檢測方法，所述方法包括如下步驟：

(1)樣品前處理：取乳制品樣品，配制成水溶液，超聲波振蕩萃取，加入高氯酸沉淀蛋白質，離心，過濾，濾液備用；

(2)固相萃取凈化：利用固相萃取柱對步驟(1)得到的濾液進行凈化，以除去其中的干擾物質，收集過柱后的樣品，氮氣吹干，備用；

(3)衍生：將步驟(2)得到的樣品用水溶解，加入過氧化氫水溶液、氫氧化鈉水溶液和水，混勻后加熱處理，然后水洗冷卻得到衍生樣品；

(4)色譜檢測：使用C18色譜柱對步驟(3)得到的衍生樣品進行檢測。

本發明利用固相萃取小柱除去食品中的大部分干擾物質，再使用過氧化氫溶液對葉酸進行衍生，最后使用高效液相色譜熒光檢測法測定食品中的葉酸含量。本發明方法具有很高的靈敏度、精密度和準確度。

根據本發明的具體實施方案，本發明的檢測方法中，所述乳制品可以為液態乳制品或是乳粉，步驟(1)中是取乳制品樣品調配成固形物含量0.1～0.2g/ml的水溶液。

根據本發明的具體實施方案，本發明的檢測方法中，步驟(1)中配制的乳制品樣品溶液先在30～50℃下超聲波萃取10～20min(本發明中超聲波功率的不同對萃取結果基本無影響)，再加入50％～60％濃度的高氯酸沉淀蛋白質，沉淀完全后4000r/min離心15min，過濾，濾液備用。

其中優選步驟(1)中配制的乳制品樣品溶液先在50℃下超聲波萃取15min。