[發明專利]一種用于前列腺癌早期診斷和治療的抗PSMA/FITC雙特異性抗體及其制備方法

有效

• 申請號: 201210564978.1
• 申請日: 2012-12-24
• 公開（公告）號: CN103087171A
• 公開（公告）日: 2013-05-08
• 發明（設計）人: 宦怡;魏夢綺;袁遠;鄭敏文;張勁松;楊勇;任靜;黃旭方;趙亞超;李昕宇
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第四軍醫大學
• 主分類號: C07K14/46
• 分類號: C07K14/46;C12N15/13;C12N15/70;G01N33/68;G01N33/574
• 代理公司: 西安新思維專利商標事務所有限公司 61114
• 代理人: 李罡

1.一種用于前列腺癌早期診斷和治療的抗PSMA/FITC雙特異性抗體，其特征在于：

所述的抗體具有如SEQ?ID?No.5的全長核酸序列：

ccctctagaaataattttgtttaactttaagaaggagatatacatatgaaatacctgctgccgaccgctgctgctggtctgctgctcctcgctgcccagccggcgatggctatggccgaggtgcagctgcagcagtcaggacccgacctggtgaagcctggggcctcaatgaagatttcctgcaaggcttctggatacacattcactgactacaacatggactgggtgaaggagagacatggaaagagccttgagtggattggagatattaatcctaaaaatggcgttactatttacaaccagaagttcaagggcaaggccacattgactgtagacaagtcctccaccacagcctacatggagctccgcagcctgacatctgaagacactgcagtctattattgtgcaagaggggactmctatggtaactactttgactactggggccaaggcaccagtctcacagtctcctcagccaaaacgacmcccaagcttggaggtggcggatccgaagttcagctggttgaatctggtggtggtctggttcagccgggtggttctctgcgtctgtcttgcgctgcttctggtttcaccttctctgactactggatgaactgggttcgtcaggctccgggtaaaggtctggaatgggttgctcagatccgtaacaaaccgtacaactacgaaacctactacgctgactctgttaaaggtcgtttcaccatctctcgtgacacctctaaaaacaccgtttacctgcagatgaactctctgcgtgctgaagacaccgctgtttactactgcaccggttcttactacggtatggactactggggtcagggtaccctggttaccgtttcttctcaccaccaccaccaccactgagatccggctgctaacaaagcccgaaaggaagctgagttggctgctgccaccgctgaccggtctgcagactagaaataattttgtttaactttaagaaggagatatacatatgaaatacctgctgccgaccgctgctgctggtctgctgctcctcgctgcccagccggcgatggctatggactacaaagacatccagatgacccagtctccgtcttctctgtctgcttctgttggtgaccgtgttaccatcacctgccgtgcttctcagtctctggttcactctcagggtaacacctacctgcgttggtaccagcagaaaccgggtaaagctccgaaagttctgatctacaaagtttctaaccgtttctctggtgttccgtctcgtttctctggttctggttctcagaccgacttcaccctgaccatctcttctctgcagccggaagacttcgctacctactactgccagcagtctacccacgttccgtggaccttcggtcagggtaccaaagttgaactgaaacgtgctggaggtggcggatccgacattcagatgacacagtctccagcctccctatctgtatctgtgggagaaactgtcaccatcacatgtcgaacaagtgagaatatttacagtaatttagcatggtatcagcagaaacagggaaaatctcctcagctcctggtctatactgcaacaaacttagcagatggtgtgccctcaaggttcagtggcagtggatcaggcacacagtattccctcaagatcaacagcctgcagtctgatgattctgggacttattactgtcaacatttttggggtactccgtacacgttcggaggggggaccaagctggaaataaaacggcaccaccaccaccaccactgactcgagcac；

上述核酸序列的長度為1783。

2.一種用于前列腺癌早期診斷和治療的抗PSMA/FITC雙特異性抗體的制備方法，其特征在于：

由以下步驟實現：

步驟一：抗PSMA/FITC雙特異性抗體核酸序列的設計與合成：

根據VL_PSMA、VH_PSMA、VL_FITC、VH_FITC的核酸序列和VH_PSMA-L-VL_FITC；?VH_FITC-L-VL_PSMA的連接形式設計相應的引物，如下表所示；

步驟二：抗PSMA/FITC雙特異性抗體表達載體的構建：

采用Pfu?Taq酶經過PCR擴增的VH_PSMA-L-VL_FITC；?VH_FITC-L-VL_PSMA基因片段分別經雙酶切后，通過T4連接酶將基因片段和表達載體pET26b在16℃連接過夜，轉化大腸桿菌DH5α后，提質粒后經XbaI和XhoI雙酶切鑒定證實1600bp處可以觀察到目的大小片段命名為pET-PHscFv；

步驟三：抗PSMA/FITC雙特異性抗體的表達和純化：

將pET-PHscFv載體轉化BL21感受態細胞后獲得pET-PHscFv的大腸桿菌表達株，第二日，挑取單克隆細胞接種LB培養基中擴增培養，第三日經IPTG后16℃低溫過夜誘導可以獲得可溶形式表達的抗體片段；15%的SDS-PAGE凝膠電泳結果顯示IPTG誘導后有一個明顯的誘導條帶，通過鎳柱親和純化后可以獲得純化的抗PSMA/FITC雙特異性抗體。