[發(fā)明專利]治療乙型病毒性肝炎的RNA干擾制劑

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210564083.8
• 申請日: 2012-12-21
• 公開（公告）號: CN103333890A
• 公開（公告）日: 2013-10-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 崔坤元;梁東
• 申請（專利權(quán)）人: 廈門成坤生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;A61K48/00;A61P31/20;A61P1/16
• 代理公司: 廈門市首創(chuàng)君合專利事務(wù)所有限公司 35204
• 代理人: 楊依展

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明是利用RNA干擾(RNA?interference,RNAi)抑制乙型肝炎病毒的復(fù)制。

背景技術(shù)

雙鏈RNA（dsRNA）抑制蛋白的表達(dá)，沉默基因，具有廣泛的、潛在的治療人類疾病的用途。dsRNA誘導(dǎo)基因沉默有三種方式：1、轉(zhuǎn)錄功能的失活，這一現(xiàn)象是指RNA指導(dǎo)下的DNA或組蛋白甲基化；2、小干擾核酸（small?interfering?RNA,siRNA）誘導(dǎo)的信使RNA(mRNA)的降解；3、RNA介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄功能的衰減。但一般認(rèn)為dsRNA誘導(dǎo)的基因干擾（抑制）指的是動物細(xì)胞內(nèi)的RNA降解。化學(xué)合成的的小分子RNA，如siRNA，能夠在亞微摩爾濃度中，酶催化下降解細(xì)胞內(nèi)的mRNA達(dá)95%以上。

RNAi的效果能夠持續(xù)很長時間，甚至持續(xù)至幾代細(xì)胞分裂，同時基因干擾是序列特異性的抑制。所以，RNAi能特異性的抑制基因表達(dá)，而不影響它異構(gòu)體或其他的mRNA，這種特異性的抑制在研究基因功能和藥物靶點(diǎn)的簽定有特別重要作用。siRNA能夠用于開發(fā)成藥物治療：1、由于基因過度表達(dá)或正常下不表達(dá)的基因；2、突變的基因而引起的疾病。

醫(yī)學(xué)應(yīng)用

RNAi能應(yīng)用于開發(fā)不同于小分子和蛋白的新一類藥物，雖然長的dsRNA引起細(xì)胞的干擾素反應(yīng)，不能直接傳遞到細(xì)胞，但siRNA的應(yīng)用還是比較成功的。已經(jīng)成功的廣泛應(yīng)用于研究并已進(jìn)行了臨床試驗(yàn)。

應(yīng)用于治療方面，首先是用于老年性黃斑性病變和呼吸道合胞病毒。其它報(bào)道的治療的疾病，包括抗病毒HIV，甲、乙、丙型肝炎、感冒和麻疹等；治療神經(jīng)性退行性病變，特別是亨廷頓氏病，如多聚谷氨酰胺疾病也有報(bào)道。RNAi也可以通過抑制過度表達(dá)的基因遏制腫瘤細(xì)胞的分裂，治療癌癥。然而，一個非常重要的領(lǐng)域是開發(fā)一個安全的siRNA傳遞技術(shù)，才能保證RNAi的臨床應(yīng)用。

盡管細(xì)胞水平的研究表明RNAi是一個非常有前途的藥物開發(fā)平臺，siRNA的脫靶效應(yīng)，是否可引起一些副作用也同時引起了注意，因?yàn)槊摪行?yīng)可抑制與靶基因相似序列的基因。據(jù)計(jì)算，脫靶效應(yīng)可達(dá)10%。在哺乳細(xì)胞，長的雙鏈siRNA可誘導(dǎo)干擾素反應(yīng)。因此，siRNA或者iNA（interferring?nucleic?acid,干擾核酸）必須保持短的序列，以避免干擾素反應(yīng)。

能夠設(shè)計(jì)一個siRNA或iNA沒有干擾素反應(yīng)最好的一個方法是設(shè)計(jì)一個治療性的iNA或siRNA能作用于一個或一個以上的靶基因，或一個靶基因的不同部位，它的結(jié)構(gòu)可是一個方向，或不同方向，環(huán)形的，類似環(huán)形的、或直線型的。這幾種類型iNA?or?siRNA與常用的siRNA的結(jié)構(gòu)不同。

據(jù)估計(jì)，乙型肝炎病毒（hepatitis?B?virus,HBV）感染的人口約高達(dá)20億人-世界人口的三分之一，超過350萬人會轉(zhuǎn)為慢性感染。據(jù)報(bào)道，15～40％的HBV感染的患者會發(fā)展為肝硬化，肝衰竭或肝癌（HCC），每年有50萬至120萬人死于HBV感染。HBV在美國的患病率估計(jì)為約0.4％。然而，自愿抽檢數(shù)據(jù)表明在某些外國出生的少數(shù)族裔群體患病率超過15％。在20世紀(jì)90年代，乙肝病毒相關(guān)的診斷門診和住院治療人數(shù)增加好幾倍。同樣，住院總費(fèi)用估計(jì)已經(jīng)從1990年的3.57億美元增加至2003年的15億美元，然后保持在13億美元。

治療HBV的最終目標(biāo)是抑制或消除HBV，緩和或停止HBV感染引起的肝損傷，防止肝功能衰竭和肝癌的發(fā)展。最重要短期和中期治療目標(biāo)是最大限度地提高HBV?DNA抑制率。但是，徹底根除B型肝炎病毒是困難的，因?yàn)樗系剿拗骰蚪M中，產(chǎn)生繼續(xù)作為潛在復(fù)發(fā)傾向的cccDNA。聚乙二醇干擾素α-2a（PEG－IFN-α）和干擾素α-2a（IFN-α），核苷類藥物（拉米夫定，恩替卡韋和替比夫定）和核苷酸類似物（阿德福韋和替諾福韋）是FDA批準(zhǔn)的抗HBV藥物市場上常用的藥物。干擾素治療的主要缺點(diǎn)是其顯著的副作用，限制其長期使用。它對失代償期肝硬化與轉(zhuǎn)氨酶正常患者往往是無效的。此外，只有三分之一的患者對PEG-IFN-α抗病毒有效。雖然核苷（酸）類似物抑制HBV復(fù)制并能使肝臟壞死性炎癥減少，但不能完全根除病毒。此外，停藥后，多數(shù)患者觀察到病毒血癥的反彈。此外，長期治療產(chǎn)生耐藥HBV病毒株，導(dǎo)致治療失敗。

RNAi是細(xì)胞內(nèi)調(diào)節(jié)基因的活性過程。它曾被稱為其他名稱，包括轉(zhuǎn)錄后基因沉默（PTGS），2006年，Andrew?Fire?and?Craig?C.Mello共同獲得諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎，以表彰他們1998年發(fā)表的文章，文章描述了他們在線蟲研究中發(fā)現(xiàn)的RNAi現(xiàn)象。