[發明專利]一種腦栓通制劑HPLC指紋圖譜的構建方法及其應用

有效

• 申請號: 201210562807.5
• 申請日: 2012-12-21
• 公開（公告）號: CN103063766A
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發明（設計）人: 蘇薇薇;龍超峰;陳思;謝稱石;彭維;劉忠政
• 申請（專利權）人: 中山大學;廣東華南藥業集團有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 深圳市惠邦知識產權代理事務所 44271
• 代理人: 孫菊梅

技術領域

本發明涉及藥物分析技術領域，特別涉及一種以天然植物藥材原料制成的腦栓通制劑HPLC指紋圖譜的構建方法及其應用。

背景技術

國際社會對藥品的要求是“安全、有效、可控”。現行的中藥質量標準，對中成藥的質量控制是以傳統的性狀鑒別和顯微鑒別確定真偽，以理化鑒別評價優劣，少數藥味對其1~2個指標成分進行檢測和控制。從傳統中醫藥觀點來看，檢測任何一種活性成分均不能反映復方制劑所體現的整體療效，中醫辨證施治用的是藥味而非某個化學成分。指紋圖譜是基于對中藥物質群整體作用的認識，借助于波譜和色譜等技術獲得中藥化學成分的光譜或色譜圖，采用“共有峰”的方式來判斷相似程度從而達到控制目的。可利用指紋圖譜表達成品的質量、實現對工藝操作和原藥材的質控；也可利用指紋追根溯源來尋找工藝操作中的問題和實現對原藥材GAP的質量要求。

腦栓通制劑是中藥復方制劑，由蒲黃、赤芍、郁金、天麻、漏蘆五味藥材組成，具有活血通絡、祛風化痰的功效，用于風痰淤血痹阻脈絡引起的缺血性中風病中經絡急性期和恢復期。由于在腦栓通制劑的生產過程中，赤芍、郁金2味藥材采用醇提工藝，蒲黃、天麻、漏蘆3味藥材采用水提醇沉工藝，故其成品中成分既有脂溶性成分又有水溶性成分，成分復雜，極性相差大。但目前腦栓通制劑的質量標準不完善，缺乏全面有效的質量控制方法，難以全面監控成品的質量、全面監控生產工藝的穩定性。現行質量標準“鑒別”項采用薄層色譜法對處方中的蒲黃、天麻、赤芍、漏蘆4味藥材進行鑒別，“含量測定”項采用高效液相色譜法測定臣藥赤芍中芍藥苷的含量，其不足之處在于：該標準操作繁瑣，沒有對郁金進行檢測；單一測定方法給出信息少，沒有對五味藥材中的化學成分進行全面、系統的檢測。

發明內容

本發明的目的是克服上述現有技術中的不足，通過對腦栓通制劑HPLC指紋圖譜構建方法的研究，提供一種有效可靠的腦栓通制劑的質量控制方法及其應用。

本發明的技術方案如下所述：本發明公開的腦栓通制劑HPLC指紋圖譜的構建方法，包括構建腦栓通制劑HPLC指紋圖譜一和腦栓通制劑HPLC指紋圖譜二，通過HPLC指紋圖譜一和HPLC指紋圖譜二共同組成了完整的腦栓通制劑的指紋圖譜特征。

所述腦栓通制劑HPLC指紋圖譜一的構建方法包括以下步驟：

(1)供試品溶液的制備：精密稱取腦栓通制劑1.0g～10.0g，用甲醇提取，濾過，取濾液適量，蒸干，用甲醇配成腦栓通制劑供試品溶液一，優選用30%的甲醇溶液配制,；

(2)采用高效液相色譜法分析供試品溶液和對照品溶液，得到HPLC指紋圖譜一，色譜條件為：進樣量5～30μl；色譜柱為ODS?C₁₈，3μm；流動相為乙腈-四氫呋喃-磷酸水溶液；梯度洗脫；0～70分鐘，流動相乙腈-四氫呋喃-磷酸水溶液由2:0:98漸變為20:10:70；柱溫20°C；檢測波長0～53min為254nm，于53min后將波長切換為275nm。

所述步驟（1）更具體為：取本品內容物適量，混勻，取約2.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率40kHz)30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過。(1)精密量取續濾液20ml，減壓回收溶劑至干，殘渣加30%甲醇溶解并轉移至10ml量瓶中，加30%甲醇稀釋至刻度，搖勻，離心，取上清液，用0.45μm微孔濾膜濾過，作為成品供試品溶液一。

所述腦栓通制劑HPLC指紋圖譜一利用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統檢測出27個共有色譜峰，歸屬于蒲黃的共有色譜峰有5個峰，分別為1號峰、3號峰、12號峰、20號峰、22號峰；歸屬于赤芍的共有色譜峰有10個峰，分別為5號峰、7號峰、11號峰、15號峰、16號峰、21號峰、23號峰、24號峰、25號峰、27號峰；歸屬于天麻的共有色譜峰有1個峰為6號峰；歸屬于漏蘆的共有色譜峰有6個峰，分別為10號峰、13號峰、14號峰、18號峰、19號峰、26號峰6；歸屬于郁金的共有色譜峰有一個峰為9號峰，不歸屬于任何藥材的共煎成分色譜峰有4個峰，分別為2號峰、4號峰、8號峰、17號峰。

所述腦栓通制劑HPLC指紋圖譜一的構建方法還包括以下步驟：

(1)對照品溶液的制備：精密稱取香蒲新苷、異鼠李素-3-O-新橙皮苷、芍藥苷、天麻素、β-蛻皮甾酮適量，加甲醇使溶解，制成混合對照品溶液，其中香蒲新苷、異鼠李素-3-O-新橙皮苷、芍藥苷、天麻素、β-蛻皮甾酮的濃度分別為0.01～3mg/ml；