[發(fā)明專(zhuān)利]一種共表達(dá)faeA和xyn11A的酵母系統(tǒng)

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210562444.5
• 申請(qǐng)日: 2012-12-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102994542A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-03-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄔敏辰;龔燕燕;殷欣;曾妍;李劍芳
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/81
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/81;C12N15/66;C12N9/42;C12N9/18;C12R1/84;C12R1/66
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• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種共表達(dá)源自宇佐美曲霉(Aspergillus?usamii)E001的阿魏酸酯酶A成熟肽基因(faeA)和β-1，4-木聚糖酶基因(xyn11A)的畢赤酵母新表達(dá)系統(tǒng)。

2.共表達(dá)faeA和xyn11A的畢赤酵母系統(tǒng)的構(gòu)建和表達(dá)方法：

(1)GS115/faeA的構(gòu)建、表達(dá)及活性測(cè)定：用Sac?I對(duì)pPICZαA-faeA進(jìn)行線性化，按照畢赤酵母表達(dá)手冊(cè)進(jìn)行電轉(zhuǎn)化GS115感受態(tài)細(xì)胞，用Zeocin篩選得到高拷貝的畢赤酵母重組子GS115/faeA；按照手冊(cè)上的標(biāo)準(zhǔn)流程進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，該工程菌用1.0％甲醇誘導(dǎo)72h，以阿魏酸甲酯為底物，高效液相法分析阿魏酸的釋放量，測(cè)得發(fā)酵液中重組阿魏酸酯酶的酶活性達(dá)7.04U/mL；

(2)工程菌GS115/faeA-xyn11A的構(gòu)建：用Sal?I對(duì)pPIC9k-xyn11A進(jìn)行線性化，按照畢赤酵母表達(dá)手冊(cè)進(jìn)行電轉(zhuǎn)化GS115/faeA感受態(tài)細(xì)胞，用G418篩選得到高拷貝的畢赤酵母重組子GS115/faeA-xyn11A；按照手冊(cè)上的標(biāo)準(zhǔn)流程進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，該工程菌用1.0％甲醇誘導(dǎo)72h，DNS法測(cè)得發(fā)酵液中重組木聚糖酶活性達(dá)600U/mL，重組阿魏酸酯酶活性仍為7.04U/mL；SDS-PAGE電泳顯示重組木聚糖酶和甘露聚糖酶分子量分別為20.7kDa和36.0kDa。