[發(fā)明專利]一種小鼠咳嗽模型的建立和檢測方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210561734.8
• 申請(qǐng)日: 2012-12-22
• 公開（公告）號(hào): CN103876855A
• 公開（公告）日: 2014-06-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 邱梅;沈巍;王德軍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 青島康地恩藥業(yè)股份有限公司
• 主分類號(hào): A61D7/00
• 分類號(hào): A61D7/00;A61B5/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于獸藥研究領(lǐng)域，涉及一種小鼠咳嗽模型的建立和檢測方法。

背景技術(shù)

由于生理解剖結(jié)構(gòu)微小，聲音信號(hào)極為微弱，研究較少且結(jié)果不一，小鼠有無咳嗽目前在國際上還存在很大爭議。印度學(xué)者和墨西哥學(xué)者將藥物刺激后的小鼠用漏斗形裝置罩住，將聽診器置于頂端進(jìn)行小鼠聲音的監(jiān)測，但結(jié)果相對(duì)主觀且不能記錄分析。我國的吳康松于2002?年發(fā)表了小鼠咳嗽模型的建立方法，主要模仿日本的Junzo?Kamei?教授的檢測方法進(jìn)行，并沒有進(jìn)行特殊的改進(jìn)。Kamei教授自上世紀(jì)九十年代起開始并堅(jiān)持使用小鼠咳嗽模型進(jìn)行鎮(zhèn)咳藥的研究，是目前使用小鼠咳嗽模型最多的學(xué)者。他使用雙腔體描艙將小鼠的頭部和身體分處于相對(duì)獨(dú)立的密閉艙中，小鼠處于清醒半固定狀態(tài)，定量霧化氨水，連接呼吸波形描記儀檢測胸部氣流的變化，主要通過觀察小鼠腹部急速抽搐運(yùn)動(dòng)同時(shí)合并異常呼吸波形進(jìn)行咳嗽的判斷。但由于沒有咳嗽聲音檢測，因此說服力較弱。因始終未能像豚鼠一樣得到聲音和波形的統(tǒng)一，小鼠咳嗽檢測至今未得到學(xué)術(shù)界的公認(rèn)，小鼠咳嗽聲音檢測是逾越這一障礙的關(guān)鍵。

豚鼠性情溫和，咳嗽反射容易引出，聲音響亮可直接聽到，自1955?年Charles?監(jiān)聽豚鼠咳嗽聲音以來，豚鼠一直是進(jìn)行咳嗽反射機(jī)制及咳嗽新藥研究的最常用動(dòng)物。2004?年美國Buxco?公司和諾華公司共同研發(fā)了豚鼠咳嗽自動(dòng)檢測軟件，其人工檢測和軟件自動(dòng)檢測的符合率已達(dá)到98％以上，在2005?年ATS?大會(huì)發(fā)布后得到了廣泛的認(rèn)可。雖然豚鼠的咳嗽檢測已十分成熟，但使用豚鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)成本較高，豚鼠體質(zhì)嬌嫩容易死亡，篩選藥物時(shí)藥物耗費(fèi)大，難以進(jìn)行多組及大批量研究。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)和不足，本發(fā)明的目的在于提供一種小鼠咳嗽模型的建立和檢測方法。

本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：一種小鼠咳嗽模型的建立和檢測方法，包括以下操作步驟：

(1)?提供雌性昆明小鼠，小鼠的年齡為8～12周齡，小鼠體重為22～25g，動(dòng)物級(jí)別為SPF級(jí)；

?(2)?利用Buxco無創(chuàng)檢測系統(tǒng)，該Buxco無創(chuàng)密閉體描艙連接有聲音監(jiān)聽設(shè)備和信號(hào)轉(zhuǎn)化器，將上述小鼠置于體描艙內(nèi)自由活動(dòng)；

?(3)?使用辣椒素激發(fā)液霧化激發(fā)小鼠咳嗽，實(shí)時(shí)監(jiān)聽小鼠咳嗽聲音，通過聲音分析軟件記錄聲波，并通過Finepointe?軟件將艙內(nèi)氣流變化轉(zhuǎn)化為呼吸波形進(jìn)行記錄并自動(dòng)實(shí)時(shí)分析。

步驟(1)?所述小鼠的年齡優(yōu)選為10?周齡。

步驟(2)?所述聲音監(jiān)聽設(shè)備為微型麥克風(fēng)。

步驟(3)?所述辣椒素激發(fā)液的濃度為10μmol/L；所述氨水激發(fā)液的霧化劑量為2.0ml/3min。

步驟(3)?所述聲音分析軟件為cooledit?軟件。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，僅需在監(jiān)聽小鼠咳嗽聲音的同時(shí)觀察小鼠咳嗽呼吸波形即可即時(shí)確定小鼠咳嗽，在小鼠咳嗽檢測同時(shí)就能得到最終數(shù)據(jù)。具有如下優(yōu)點(diǎn)和有益效果：

(1)?本發(fā)明利用原本用于肺功能檢測的Buxco?的無創(chuàng)肺功能檢測系統(tǒng)儀器裝置，來進(jìn)行小鼠咳嗽的檢測，這是國際首創(chuàng)；

(2)?直接監(jiān)聽小鼠咳嗽聲音，并記錄保存進(jìn)行回放分析，從而確保咳嗽數(shù)據(jù)的客觀性和準(zhǔn)確性，為FP?軟件開發(fā)提供可靠的數(shù)據(jù)來源；

(3)?小鼠呼吸波形分析更為細(xì)致，通過Buxco?系統(tǒng)FP?軟件得到的呼吸波形區(qū)分為7?類，可更加準(zhǔn)確地辨認(rèn)性質(zhì)特征；

?(4)?無需觀察小鼠腹部運(yùn)動(dòng)情況，減少主觀因素對(duì)判斷的影響；

?(5)?無需分析聲波變化，避免雜音干擾影響數(shù)據(jù)分析。

?(6)?本方法可大大降低工作強(qiáng)度，節(jié)省工作時(shí)間，提高工作效率，有利于小鼠咳嗽模型的推廣和應(yīng)用。在本研究基礎(chǔ)上與美國Buxco?公司合作開發(fā)的Finepointe?小鼠咳嗽檢測軟件具有較高的相關(guān)性和一致性，顯示了良好的開發(fā)前景和應(yīng)用價(jià)值。