[發(fā)明專利]乳桿菌深凍產(chǎn)品及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210561051.2
• 申請(qǐng)日: 2012-12-21
• 公開（公告）號(hào): CN103013832A
• 公開（公告）日: 2013-04-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張?zhí)m威;馮鎮(zhèn);韓雪;杜明;易華西;張莉麗;張英春;單毓娟;范榮波
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 哈爾濱工業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/04
• 分類號(hào): C12N1/04;C12N1/20;C12R1/225;C12R1/23
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及嗜酸乳桿菌、副干酪乳桿菌或鼠李糖乳桿菌的深凍干粉制劑的制備方法。

背景技術(shù)

深凍發(fā)酵劑產(chǎn)品存在生產(chǎn)成本低、活力強(qiáng)、穩(wěn)定性好、貯存期長(zhǎng)的優(yōu)點(diǎn)。需要克服的技術(shù)難題是如何增加前期高密度培養(yǎng)的活菌數(shù)和后期深凍的存活率。針對(duì)上述技術(shù)難題，本發(fā)明專利采用分子營(yíng)養(yǎng)、發(fā)酵過(guò)程參數(shù)和深凍菌體保護(hù)優(yōu)化技術(shù)優(yōu)化出高密度培養(yǎng)基的組成、發(fā)酵過(guò)程參數(shù)控制模式和菌體深凍保護(hù)劑的組成和控制模式，有效的解決了上述技術(shù)難題。嗜酸乳桿菌、副干酪乳桿菌或鼠李糖乳桿菌都屬于乳酸菌，革蘭氏染色陽(yáng)性、無(wú)芽孢桿菌，在其凍干制劑的生產(chǎn)中，存在菌體死亡率較高及穩(wěn)定性能差的缺點(diǎn)，致使產(chǎn)品中活菌含量少、用量大、發(fā)酵效果差，制造和使用成本均較高。

?本發(fā)明的目的是為了解決上述問題，提供嗜酸乳桿菌、副干酪乳桿菌或鼠李糖乳桿高密度培養(yǎng)的培養(yǎng)基及其深凍產(chǎn)品的制備方法。?

發(fā)明內(nèi)容

具體技術(shù)方案一：特別優(yōu)選的一種培養(yǎng)基，一種在制備嗜酸乳桿菌、副干酪乳桿菌或鼠李糖乳桿菌深凍產(chǎn)品過(guò)程中使用的培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基由以下組分及用量配制而成：80-120g的脫脂乳粉，50-70g的甜菜糖蜜，40-60g的玉米淀粉糖漿、25g的NaCl、5g的谷胱甘肽、25-30g的酵母膏或酵母粉、12mg的尿嘧啶和黃嘌呤、0.005mg的生物素和葉酸、2.0mg的尼克酸和泛酸鈣、2.0mg的核黃素及1.0mg鹽酸硫胺素加入蒸餾水并定容至1000mL；其中，優(yōu)選尿嘧啶和黃嘌呤的比例為1：2；生物素和葉酸的比例為1：1；尼克酸和泛酸鈣的比例為1：3，培養(yǎng)基中的NaCl是在發(fā)酵進(jìn)行到8h時(shí)添加到發(fā)酵液中的；上述配比帶來(lái)了難以預(yù)料的技術(shù)效果。普通常規(guī)培養(yǎng)基也適用于本發(fā)明。

具體技術(shù)方案二：深凍保護(hù)劑，其組成及配制：25g的脫脂乳粉、2g的斯盤60、10g的海藻糖、5g的蔗糖糖蜜和1.5g的維生素C，5g的甘油、0.5g的細(xì)胞松弛素B，將上述保護(hù)劑的干粉和液體直接加入到發(fā)酵液中，上述保護(hù)劑中的干粉采用輻照的方式進(jìn)行滅菌，液體采用濕熱的方式滅菌，將此混合物在4~10℃的環(huán)境中放置12h。

具體技術(shù)方案三：嗜酸乳桿菌、副干酪乳桿菌或鼠李糖乳桿菌深凍產(chǎn)品的制備方法，按以下步驟進(jìn)行：

1、高密度培養(yǎng)

將經(jīng)過(guò)活化的菌株以2%的接種量接種于滅菌的培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵；發(fā)酵過(guò)程中pH采用兩段式，總發(fā)酵時(shí)間10h，第一階段將發(fā)酵液的pH用質(zhì)量濃度10%的氨水控制在6.0-6.5，發(fā)酵7.0h；第二階段不控制發(fā)酵液的pH，發(fā)酵3.0h；發(fā)酵過(guò)程中采用變溫培養(yǎng)模式，第一階段將發(fā)酵溫度控制在42.5-45℃，發(fā)酵3.5h；第二階段將發(fā)酵溫度控制在35-37℃，發(fā)酵3.5h；第三階段將發(fā)酵溫度控制在37-40℃，發(fā)酵3h；其中所述培養(yǎng)基為：80-120g的脫脂乳粉，50-70g的甜菜糖蜜，40-60g的玉米淀粉糖漿、25g的NaCl、5g的谷胱甘肽、25-30g的酵母膏或酵母粉、12mg的尿嘧啶和黃嘌呤、0.005mg的生物素和葉酸、2.0mg的尼克酸和泛酸鈣、2.0mg的核黃素及1.0mg鹽酸硫胺素加入蒸餾水并定容至1000mL；在發(fā)酵過(guò)程中攪拌速度為120rpm，直至發(fā)酵結(jié)束。此外，培養(yǎng)基中的NaCl是在發(fā)酵進(jìn)行到8h時(shí)添加到發(fā)酵液中的。

2、洗脫

發(fā)酵液在0～20℃時(shí)，加入與發(fā)酵液等重量的質(zhì)量濃度為15%的檸檬酸鈉溶液或質(zhì)量濃度為15%的磷酸鈉溶液對(duì)發(fā)酵液進(jìn)行蛋白洗脫。

3、富集

洗脫結(jié)束后，將發(fā)酵液的溫度降至4℃，依次采用膜過(guò)濾、連續(xù)式離心進(jìn)行濃縮，具體膜濃縮操作為：用孔徑為100～200nm、面積為1.0m²的陶瓷膜，在跨膜壓力為150KPa進(jìn)行膜濃縮處理，至發(fā)酵液的濃縮倍數(shù)達(dá)到3；離心濃縮具體為：以30kg/min的進(jìn)料量用連續(xù)自動(dòng)出料離心機(jī)式進(jìn)行離心濃縮，控制出料量為5kg/min；?

4、菌體的深凍保護(hù)

將上述獲得的發(fā)酵液與深凍保護(hù)劑以質(zhì)量比為10︰1~10︰2進(jìn)行混合，然后進(jìn)行冷貯。

保護(hù)劑的組成為：25g的脫脂乳粉、2g的斯盤60、10g的海藻糖、5g的蔗糖糖蜜和1.5g的維生素C，5g的甘油、0.5g的細(xì)胞松弛素B，將上述保護(hù)劑的干粉和液體直接加入到發(fā)酵液中，上述保護(hù)劑中的干粉采用輻照的方式進(jìn)行滅菌液體采用濕熱的方式滅菌，將此混合物在4~10℃的環(huán)境中放置12h。

5、菌體的深凍