[發明專利]一種生牛乳體細胞檢測試紙及其制備方法

有效

• 申請號: 201210560818.X
• 申請日: 2012-12-21
• 公開（公告）號: CN103063662A
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發明（設計）人: 富鑫
• 申請（專利權）人: 內蒙古伊利實業集團股份有限公司
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N1/38
• 代理公司: 北京三友知識產權代理有限公司 11127
• 代理人: 姚亮

技術領域

本發明涉及一種生牛乳體細胞檢測試紙及其制備方法，屬于食品檢測技術領域。

背景技術

牛乳中的體細胞數(Somatic?Cell?Count，SCC)是指每毫升牛乳中的細胞總數。體細胞中大多數是白細胞(即巨噬細胞、嗜中性白細胞和淋巴細胞)，約占體細胞數的95％以上，其余為脫落的上皮細胞。產自健康乳房牛乳SCC通常小于10萬/mL，包括1-7％的上皮細胞和30-74％的巨噬細胞。

影響牛乳SCC的因素很多。一般來說，微生物是誘發乳房炎、引起SCC增加的主要原因，95％的乳房炎是由金黃色葡萄球菌、無乳鏈球菌、大腸埃希氏桿菌等引起的。其次，當乳房因外傷或發生疾病出現炎癥時，也可引起SCC大量增加。因此，牛乳中SCC是奶牛乳房健康狀況和牛乳質量及防治乳房炎的重要指標。

SCC的增多會引起牛乳產量的下降，鮮奶品質下降，炎乳廢棄，嚴重時乳區化膿壞疽，使奶牛失去泌乳能力。每頭患隱性乳房炎母牛平均日產奶量降低4％-10％。全世界約有2.2億頭奶牛，其中約有1/3的奶?；加懈鞣N類型的乳房炎，每年因乳房炎造成的損失高達350億美元。在我國奶牛飼養條件更為粗糙，乳房炎的發病率更高，確切經濟損失無法統計。我國的收購標準一般認為SCC小于50萬/mL的牛乳為合格乳；超過50萬/mL母?；既榉垦孜ｋU性很大。而在歐美國家收購標準是，高質量的牛乳SCC應少于20萬/mL，超過這個范圍牛乳的品質就會下降；合格乳SCC一般在20-50萬/mL之間；乳房炎乳SCC達到60-120萬/mL。新兩蘭和澳大利亞的標準是SCC少于40萬/mL。

牛乳SCC的檢測方法可分為直接檢測和間接檢測兩種。直接檢測法包括顯微鏡檢測(標準顯微鏡法和熒光顯微鏡法)、熒光流式細胞計數法、電阻式粒度分析方法等。間接檢測法包括加利福尼亞細胞數測定法(CMT)、威斯康辛乳腺炎試驗(WMT)、4％NaOH凝乳法以及pH檢驗法等。

現有方法存在的問題是：儀器設備昂貴，運行成本高；檢測精度差；檢測耗時長；或操作繁瑣，需要專業的技術人員進行操作。目前還沒有一種既經濟、快速準確，又操作簡便的方法。因為檢測技術及成本的限制，我國乳品行業與奶牛飼養業極少對牛乳的SCC進行檢測，只有少數集約化管理的牧場應用丹麥FOSS公司產的體細胞檢測儀進行月檢，但是檢測費用昂貴。

隨著乳品業的不斷發展，體細胞的檢測工作將逐漸變成一項日常工作，而現有的檢測原料乳體細胞數的方法存在耗時長、操作繁瑣、且需要專業的技術人員進行操作、成本高、及不夠準確的問題。因此，研發出一種新的生牛乳體細胞檢測方法或儀器仍是本領域亟待解決的問題之一。

發明內容

為解決上述技術問題，本發明的目的在于提供一種生牛乳體細胞檢測試紙及其制備方法。該試紙在使用時操作簡便，能夠經濟、準確地用于奶牛乳房炎的日常監測，以及生牛乳體細胞指標日常檢測。

為達上述目的，本發明提供一種生牛乳體細胞檢測試紙的制備方法，其包括以下步驟：

第一次浸泡：將濾紙在表面活性劑溶液中浸泡1-10min，然后在緩沖液中浸泡1-10min；

第一次烘干；

第二次浸泡：將第一次烘干后的濾紙在第二次浸泡液中浸泡1-5min；

第二次烘干，得到所述生牛乳體細胞檢測試紙。

在上述制備方法中，第一次浸泡所采用的表面活性劑溶液和緩沖液的用量，以及第二次浸泡所采用的第二次浸泡液的用量為使濾紙全部浸泡在其中即可。

在上述制備方法中，優選地，所述表面活性劑溶液包括Tween-20溶液、Tween-80溶液、Triton?X-100溶液和EDTA溶液中的一種或幾種的組合。上述的表面活性劑溶液均為本領域常規使用的表面活性劑溶液，其溶劑可以均為PBS，其濃度可以為常規使用的濃度。將濾紙浸泡于表面活性劑溶液中，表面活性劑起到增溶、增敏的作用，能夠使第二次浸泡液的有效成分在濾紙中均勻分布。更優選地，所述表面活性劑溶液為EDTA溶液；最優選地，所述EDTA溶液的濃度為0.05-0.2重量％。

在上述制備方法中，優選地，所述緩沖液包括Tris-鹽酸緩沖液、磷酸鹽緩沖液、硼砂-鹽酸緩沖液和巴比妥鈉-鹽酸緩沖液中的一種或幾種的組合。由于第二次浸泡液與生牛乳反應的pH條件為pH＝7.0-8.5，將濾紙浸泡于緩沖液中，起到調節濾紙pH的作用。更優選地，所述緩沖液為Tris-鹽酸緩沖液；最優選地，所述Tris-鹽酸緩沖液的濃度為0.05-0.2mol/L。