[發(fā)明專利]一種具有降血糖活性的低分子量殼聚寡糖磺酰胺衍生物的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210560713.4
• 申請(qǐng)日: 2012-12-21
• 公開（公告）號(hào): CN103030714A
• 公開（公告）日: 2013-04-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 辛瑜;夏小樂(lè);繆銘;王武
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號(hào): C08B37/08
• 分類號(hào): C08B37/08;A61P3/10
• 代理公司: 無(wú)錫市大為專利商標(biāo)事務(wù)所 32104
• 代理人: 時(shí)旭丹;劉品超

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種具有降血糖活性的低分子量殼聚寡糖磺酰胺衍生物的制備方法，屬于生物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

殼聚糖是由自然界廣泛存在的幾丁質(zhì)經(jīng)過(guò)脫乙酰作用得到的，化學(xué)名稱為聚葡萄糖胺(1-4)-2-氨基-B-D葡萄糖，這種天然高分子的生物官能性和相容性、血液相容性、安全性、微生物降解性等優(yōu)良性能被各行各業(yè)廣泛關(guān)注，在醫(yī)藥、食品、化工、化妝品、水處理、金屬提取及回收、生化和生物醫(yī)學(xué)工程等諸多領(lǐng)域的應(yīng)用研究取得了重大進(jìn)展。針對(duì)患者，殼聚糖降血脂、降血糖的作用已有研究報(bào)告。

磺胺類化合物在醫(yī)藥和農(nóng)藥上具有廣泛的生物活性,如:殺菌、除草、殺蟲、抗癌、抗糖尿病等。近年來(lái)對(duì)磺酰胺類化合物的研究比較多,先后開發(fā)出了磺菌胺、甲磺菌胺等高效低毒的殺菌劑;大量具有抗腫瘤活性的磺酰胺類化合物被報(bào)道,其中一些化合物已進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段；此外，還有大量磺酰胺類化合物在報(bào)道中具有降血糖、抗糖尿病的活性。

環(huán)氧氯丙烷是一種常用的活化試劑，能夠作用于羥基、氨基、羧酸基、巰基等活性基團(tuán)。本實(shí)驗(yàn)中使用環(huán)氧氯丙烷活化殼聚寡糖的氨基，使用環(huán)氧基與磺酰胺類化合物進(jìn)行交聯(lián)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供提制備小分子殼聚寡糖磺酰胺衍生物的方法，本發(fā)明設(shè)計(jì)巧妙、條件溫和、易操作、成本低、環(huán)境污染小、適于大規(guī)模應(yīng)用。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案：一種具有降血糖活性的低分子量殼聚寡糖磺酰胺衍生物的制備方法，步驟為：

（1）醋酸酸解-雙氧水氧化偶聯(lián)法制備分子量2.5-3?kDa之間的殼聚寡糖：調(diào)整殼聚糖溶液（濃度15-20?g/L）中醋酸終濃度為0.5?mol/L，雙氧水質(zhì)量終濃度為3%，反應(yīng)3小時(shí)，控制反應(yīng)溫度為50℃；

（2）環(huán)氧氯丙烷法活化制備的殼聚寡糖：步驟（1）制備的殼聚寡糖吸附于DEAE-Sephadex?A-50介質(zhì)（GE?Healthcare），使用8倍殼聚寡糖氨基的環(huán)氧氯丙烷，反應(yīng)pH為8.0，溫度為40℃進(jìn)行活化，活化時(shí)間為24-30小時(shí)；

（3）利用磺酰胺類化合物對(duì)活化后殼聚寡糖進(jìn)行修飾。將步驟（2）活化的殼聚寡糖產(chǎn)物與兩倍環(huán)氧基當(dāng)量的磺酰胺類化合物偶聯(lián)，修飾反應(yīng)條件為pH12，?溫度為50℃；

所述磺酰胺類化合物選用甲磺酰胺、苯磺酰胺、對(duì)氨基苯磺酰胺及鄰氨基苯磺酰胺之一種；殼聚寡糖修飾實(shí)驗(yàn)在DEAE-Sephadex?A-50介質(zhì)（GE?Healthcare）上進(jìn)行；

（4）修飾后產(chǎn)物使用Sephadex?G-50（GE?Healthcare）進(jìn)行分子篩層析去除未反應(yīng)物質(zhì)。

所得低分子量殼聚寡糖磺酰胺衍生物在小鼠實(shí)驗(yàn)中具有顯著的降血糖能力，與未給藥組相比，血糖水平降至70%，均比原始的未修飾殼聚寡糖及磺酰胺類物質(zhì)具有較高的降血糖能力，降血糖能力提高10%-20%。

較佳地，在步驟（1）中，醋酸濃度為0.5?mol/L，雙氧水濃度為3%。

較佳地，所述反應(yīng)時(shí)間為3小時(shí)，所述反應(yīng)溫度為50℃。

較佳地，在步驟（2）中，環(huán)氧氯丙烷與殼聚寡糖氨基比例為8：1。

較佳地，所述反應(yīng)pH值維持在8.0，溫度為40℃。

較佳地，在步驟（3）中，殼聚寡糖與磺酰胺類化合物環(huán)氧基比例為2：1。

較佳地，所述反應(yīng)pH值維持在12.0，溫度為50℃。

本發(fā)明的有益效果：

1、本發(fā)明以殼聚寡糖為基質(zhì)，通過(guò)醋酸酸解-雙氧水氧化偶聯(lián)法制備了均一的低分子量殼聚寡糖；

2、本發(fā)明通過(guò)對(duì)殼聚寡糖的修飾，優(yōu)化了其降血糖的能力。

附圖說(shuō)明

圖1連續(xù)給藥21天后,?眼眶靜脈取血測(cè)血糖的結(jié)果。

具體實(shí)施方式

為了能夠更清楚地理解本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容，特舉以下實(shí)施例詳細(xì)說(shuō)明。

實(shí)施例1??反應(yīng)時(shí)間對(duì)殼聚寡糖分子量的影響的影響：

稱取2.5g脫乙酰化殼聚糖原料溶于150?mL醋酸溶液中，其中醋酸濃度為0.5?mol/L，雙氧水濃度為3?%。在50℃水浴下分別反應(yīng)1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5小時(shí)。獲得產(chǎn)物溶液用NaOH調(diào)節(jié)pH至10，獲得殼聚寡糖沉淀。利用高效液相凝膠滲透色譜法測(cè)定殼聚寡糖的分子量范圍，結(jié)果見表1。

表1反應(yīng)時(shí)間對(duì)殼聚寡糖分子量的影響