[發明專利]20(s)-原人參二醇-3-酮的提取分離方法

有效

• 申請號: 201210560555.2
• 申請日: 2012-12-21
• 公開（公告）號: CN102977176A
• 公開（公告）日: 2013-03-20
• 發明（設計）人: 周媛媛;于瑩;付蕾
• 申請（專利權）人: 黑龍江中醫藥大學
• 主分類號: C07J9/00
• 分類號: C07J9/00
• 代理公司: 南京匯盛專利商標事務所(普通合伙) 32238
• 代理人: 裴詠萍

技術領域

????本發明涉及一種三萜類化合物的提取分離方法，具體涉及20(s)-原人參二醇-3-酮的提取分離方法。

背景技術

腫瘤是一種常見病、多發病，其中惡性腫瘤是目前危害人類健康最嚴重的一類疾病。劉星堦研究發現人參二醇型皂苷元和人參二醇葡萄糖苷(尤其是人參皂苷Rh₂)具有高度細胞毒活性（達瑪烷型三萜研究的進展，國外醫學·藥學分冊，1987，3，141-144）。

研究發現20(s)-原人參二醇-3-酮是俄羅斯學者Morita?M.?和?Atopkina，?L.?N.等將樺葉烯三醇轉化為人參皂苷Rh₂及其它人參皂苷化學合成研究中的關鍵中間產物（王紅燕等，人參化學成分研究的新進展，中國藥物化學雜志，1992，2(1)：64-70）。因此通過20(s)-原人參二醇-3-酮合成的化學產物能開發成為抗腫瘤藥物的藥效物質成分。

目前通常采用合成方法制備20(s)-原人參二醇-3-酮，工藝復雜。周媛媛等首次從青龍衣中分離得到20(s)-原人參二醇-3-酮（周媛媛等，中草藥，2010，41(1)：11-14），但分離過程復雜，尤其是反復硅膠柱層析過程，需要技術人員的經驗判斷，不斷調整實驗參數，不適合工業化生產，且產率較低。

發明內容

本發明的目的是為了解決現有技術中存在的缺陷，提供一種步驟明確、且產率較高的20(s)-原人參二醇-3-酮的提取分離方法。

為了達到上述目的，本發明提供了一種20(s)-原人參二醇-3-酮的提取分離方法，包括以下步驟：

（1）提取：取干燥的青龍衣藥材，乙醇提取，提取液濃縮得乙醇浸膏；乙醇的濃度為90%～100%，優選95%；

（2）萃取分離：將步驟（1）中制備的乙醇浸膏加水制備懸浮液，依次采用二氯甲烷萃和乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯萃取液濃縮得乙酸乙酯浸膏；

（3）硅膠柱層析：取步驟（2）中制備的乙酸乙酯浸膏進行硅膠柱層析，依次采用體積比為15:1～10:1（優選體積比為15:1）的石油醚和乙酸乙酯混合液、體積比為8:1～5:1的石油醚和乙酸乙酯混合液進行梯度洗脫，收集體積比為8:1～5:?1（優選體積比為5:1）的石油醚和乙酸乙酯混合洗脫液；石油醚的沸程為60～90℃；

（4）二次硅膠柱層析：將步驟（3）中收集的洗脫液進行硅膠柱層析，采用二氯甲烷和甲醇的混合液進行等度洗脫或梯度洗脫；采用等度洗脫時，所述二氯甲烷和甲醇的體積比為8:1，收集2.5個柱體積后的洗脫液；采用梯度洗脫時（優選洗脫方式），依次采用的體積比為12:1的二氯甲烷和甲醇混合液、體積比為8:1的二氯甲烷和甲醇混合液進行梯度洗脫，收集體積比為8:1的二氯甲烷和甲醇混合洗脫液；

（5）反相柱層析：取步驟（4）中收集的洗脫液，進行C18反相柱層析，依次采用30%甲醇和60%的甲醇進行梯度洗脫；收集60%甲醇洗脫液，回收溶劑，即得20(s)-原人參二醇-3-酮。

將20(s)-原人參二醇-3-酮進行甲醇重結晶即得純度更高的產品。

其中，步驟（1）中乙醇的用量為每克藥材采用6～10ml（優選8ml），優選提取方式采用超聲提取0.5～1.5h，最佳提取時間50min，反復提取一次，合并提取液。

步驟（2）中混懸液制備時加入蒸餾水的重量為乙醇浸膏的5倍，采用占所述蒸餾水體積的0.75～1倍量（優選等體積量）的二氯甲烷和乙酸乙酯依次進行兩相回流萃取1h。

步驟（3）和步驟（4）中硅膠柱層析均采用干法上樣，拌樣硅膠采用80～100目硅膠，裝柱硅膠采用200～300目硅膠。其中，步驟（3）中乙酸乙酯浸膏與拌樣硅膠的重量比為1:1.5，乙酸乙酯浸膏與裝柱硅膠的重量比為1:20；步驟（4）中進行柱層析前，先將步驟（3）中收集的洗脫液濃縮至浸膏，浸膏進行干法上樣，浸膏與拌樣硅膠的重量比為1:1，浸膏與裝柱硅膠的重量比為1:30。

步驟（5）中C18反相柱采用預先處理好的體積為2cm×100cm的常壓敞口玻璃層析色譜柱（C-18反相填料為YMC公司生產，填料粒徑≥50μm），洗脫液流速為1ml/min。